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基因芯片细胞标本采集操作建议规程

省部重点实验室

2012/03/06

生命科学仪器综合讨论

细胞标本采集操作建议规程

1. 所有样品均应有样品标签（注明样品编号），同时有一张样品登记表，写明样品名称、种类、编号、取样日期、样品处理情况等。

2. 一张芯片实验一般要求细胞数在1E+08，建议设计实验和收获细胞时可考虑多收集一些。

3. 贴壁与悬浮细胞培养诱导结束后，去除培养液，保留的细胞用PBS缓冲液洗一下，除去缓冲液，加溶液D*充分溶解细胞，放入液氮运输。样品量以实际得到的total RNA为准。

4. 血液：将白细胞分离出来，加溶液D充分溶解细胞，放入液氮运输。样品量以实际得到的total RNA为准。

5. 如果是细胞未经溶液D处理，直接冻入液氮罐（不推荐）。工作人员会对细胞作相关处理，以便为细胞记数。

6. 以上提到的均是新鲜细胞，对一些已老化或质量不明的细胞，工作人员有权提出疑义，并要求退回或重新取样。

组织标本采集操作建议规程

取标本所需关键器材和处理要求铝箔经DEPC水浸泡过夜，78℃烘干，高压灭菌后烘干。

1.5 ml 微离心管
　　15 ml 聚丙烯离心管市场有售RNAase-Free的相应规格离心管
　　标签纸
　　记号笔
　　样品登记表由客户指定专人填写
　　液氮罐应常备液氮罐，并保证液氮的来源
　　取材部位的病理切片由客户提供1-2张

注：

· 以下步骤1 － 5应在冰上进行且不超过15分钟，超过时间会导致样品的RNA降解。

· 对肿瘤组织的取材，要求尽可能准确地判定肿瘤和正常组织，例如对于手术切除的整个或部分前列腺，可能要根据冰冻切片报告的结果来判定要进行研究的取材部位。

1. 离体新鲜组织，切成多个1cm3小块，剔除结缔组织和脂肪组织。胃、肠组织应剪除外膜；肝、肾、脾应剪除门部血管神经，肿瘤组织应将周围的正常组织切除干净（正常组织也应将周围的肿瘤组织切除干净）。

2. 在RNase-Free 0.9％生理盐水中漂洗样品，以去除血渍和污物。

3. 用铝箔包裹组织，或用5ml冻存管装载组织(但最好统一采用铝箔)。用记号笔在铝箔或冻存管外表写明样品编号，并贴上标签，迅速投入液氮冷却。

4. 填写样品登记表，写明样品名称、种类、编号、取样日期、样品处理情况等。

5. 将液氮冷却的组织放入样品袋（每个样品袋只保存同样的组织），袋口留一根编号绳，绳上粘一张标签纸（标签上注明：样品名称、编号、日期），迅速转入便携式液氮罐。

6. 保留1-2张取材部位的病理切片。

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