HPLC分析中常见问题③——保留时间篇

2.保留时间无规律改变
这种情况应从以下两个方面进行排查：
（1）泵的送液稳定性
→使用移液管或量筒对出口端流量进行确认
→使用前，对流动相进行充分脱气；分析中，对流动相进行在线脱气
（2）柱温稳定性
→使用柱温箱，保持柱温恒定
→建议将柱温设定在室温±5℃以上，更利于柱温的稳定
3.离子化合物的保留时间不稳定
流动相的pH值不合适→流动相的pH值应设定在 pKa±2.0 以上

二、更换新色谱柱时，保留时间不能和之前的色谱柱重复

1.如果建立方法时使用的是旧色谱柱，那么新色谱柱很难重复保留时间

→建议使用新色谱柱进行方法的建立

2.使用过离子对试剂、在酸性或碱性条件下使用过的色谱柱，往往重现性相对较差

→建议专柱专用

3.需要事先了解不同批次色谱柱对样品分离会带来多大影响（特别是分离度不高的情况下）

→资生堂可根据客户需要，同时提供三个批次的色谱柱以供客户考察批次间差异

以上就是HPLC分析中常见问题③——保留时间篇，希望能对大家的工作有所帮助～

应助达人

新色谱柱要重新进样，确定保留时间。

是的，新旧柱差异和批次间差异都需要考虑。