仪器信息网APP

选仪器、听讲座、看资讯

立即体验

当前位置：仪器社区 >食品检测 > 食品毒素/微生物检测 > 帖子详情

产气荚膜梭菌初试验

海润Kevin

2017/08/14

食品毒素/微生物检测

1. 适应范围和应用领域
1.1. 适应于饮用天然矿泉水中产气荚膜梭菌的测定
2. 方法原理
2.1. 采用滤膜法。取50ml的水样用孔径为0.22um的滤膜过滤，然后将滤膜移至SPS琼脂培养基上，倒置于36℃±1℃厌氧培养24h，计数黑色菌落，任意挑取3个-5个在滤膜上生长的黑色菌落，分别接种FT培养基，于36℃±1℃厌氧培养18-24h后，将培养物做确证实验，根据实验结果确证产气荚膜梭菌的存在。
3. 试剂
3.1. 庖肉培养基
3.2. 亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂（SPS）
3.3. 液体硫乙醇酸盐培养基（FT）
3.4. 动力-硝酸盐培养基（A法）
3.5. 卵黄琼脂培养基
4. 仪器及设备
4.1. 恒温培养箱
4.2. 厌氧培养装置
4.3. 滤器
5. 操作
5.1. 样品测定
5.1.1. 安装好过滤装置，在100级洁净工作台进行过滤操作。取50ml水样（若含菌量较多，可用0.1%蛋白胨水将水样按比例稀释）注入装有滤膜的滤器中，打开滤器阀门进行抽滤。
5.1.2.结束过滤操作，用无菌镊子将滤膜倒置在SPS琼脂培养基上（或正置于SPS培养基上，在上层覆盖约5mlSPS培养基创建厌氧环境），滤膜应与培养基完全贴紧，两者不留气泡。
5.1.3.倒置于厌氧装置中在36℃±1℃厌氧培养24h。计数平板上的黑色菌落数。
5.2.确证性试验
挑取可疑黑色菌落3-5个，分别接种FT培养基，于36℃±1℃厌氧培养18-24h
5.2.1. 革兰氏染色镜检：产气荚膜梭菌为革兰氏阳性粗大杆菌，其耐热菌株可能形成卵形芽孢，位于菌体中央或近端，其宽度一般不大于菌体。
5.2.2. 动力硝酸盐试验：接种针穿刺，36℃±1℃厌氧培养24h，观察接种线的生长情况，判断有无动力。然后滴加A液和B液2-3滴，观察硝酸盐是否被还原。产气荚膜梭菌现象：无动力；硝酸盐阳性。
5.2.3. 含铁牛乳培养基试验:取生长旺盛的FT培养液1ml接种含铁牛乳培养基，在46℃培养2h后观察“爆裂发酵”现象。在5h内不发酵为阴性。产气荚膜梭菌为阳性。
5.2.4.卵黄琼脂试验：接种针取FT培养液点种于卵黄琼脂平板，，36℃±1℃厌氧培养24h，观察接种点变化。产气荚膜梭菌会分解卵黄中的卵磷脂，接种点底部及周围形成乳白色浑浊带。
5.3.结果表述:
根据黑色菌落计数和确证性试验结果，计算每50ml水样中的产气荚膜梭菌数量，结果以CFU/50ml计。
附图：

菌株培养---庖肉培养基（图左），疱肉斜面培养基（图右）

产气荚膜梭菌在SPS培养基上的现象（图左）及大肠杆菌阴性对照

在FTG培养基上生长旺盛

动力-硝酸盐培养基（+）含铁牛乳培养基（+）含铁牛乳培养基（—）

产气荚膜梭菌在血平板上的溶血现象。

相关话题

我是风儿

第1楼2017/08/18

应助达人

请问你们所用的厌氧培养箱是哪种的，能否上个图片？

0

我是风儿

第2楼2017/08/18

应助达人

溶血现象如何观察？

0

海润Kevin

第3楼2017/08/21

我们使用厌氧罐里面加个厌氧袋，用普通培养箱做的，
我是风儿(nphfm2009) 发表:请问你们所用的厌氧培养箱是哪种的，能否上个图片？

0

海润Kevin

第4楼2017/08/21

看血平板的第一幅图，有明显的溶血圈，若不溶血看不出来，跟买的血平板一样
我是风儿(nphfm2009) 发表:溶血现象如何观察？

0

小米辣c

第5楼2020/05/12

请问做这个有危险吗？

0

近期热榜

热门活动

猜你喜欢最新推荐热门推荐

品牌合作伙伴

日立科学仪器

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

日本电子株式会社

赛默飞世尔科技

马尔文帕纳科

上海仪电科仪

梅特勒托利多

布鲁克核磁

举报帖子

点赞用户

好友列表

加载中...

正在为您切换请稍后...