本篇内容与大家分享的是植物性食品中代森锰锌的实验，对实验中遇到的问题进行了分析，强化实验过程的细节，提高自身科研水平，共同改进实验过程。本文重点对此实验提PH值
，PH不准确会导致整个实验没有效果。
摘要：本方法研究了植物性食品中代森锰锌残留量的LC/MS/MS方法，利用碱性乙二胺四乙酸二钠提取，甲酯化反应后，经HLB固相萃取柱净化后上机检测。标准曲线线性良好，相关系数r2>0.999，样品回收率89.65%~93.46%，相对偏差RSD<6%。
1前言
代森锰锌是乙撑二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂，主要应用于防治果树、蔬菜、花卉及其它经济作物中藻菌纲和半知菌类引起的霜霉病、斑病、赤霉病等。由于代森锰锌的应用十分广泛，并且主要杂质和分解产物乙撑硫脲(ETU)具有致癌、致畸、致突变作用，因此引起广泛关注。代森锰锌难溶于水且不溶于大多数有机溶剂，只能采用间接方法测定。近年来，对代森锰锌残留方法的研究集中在甲基化后检测其衍生物亚乙基-1，2-双二硫代氨基甲酸甲酯(EBDC-dimethyl)。
本研究采用碘甲烷为甲基化试剂，建立了代森锰锌在植物性食品中残留分析的检测方法，利用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS /MS) 在多反应离子监测模式下进行检测。本方法有效地去除了干扰，提高了灵敏度，定性与定量分析准确。本方法简便快捷，易操作，能够满足苹果中代森锰锌的残留量的快速检测和确证的要求。
2实验部分
2.1 仪器与试剂
1290 infinity II超高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；6460 Triple Quad LC/MS（美国Agilent公司）；Visiprep 24 TM Dl固相萃取装置（美国Supelco visiprep公司）； XW-80A漩涡混合器（中国上海沪西）；L400离心机（中国湖南湘仪）；HLB固相萃取柱3cc 60 mg（美国 Waters公司）。
甲醇和乙腈（HPLC级，德国Merck公司）；甲酸（HPLC级，中国上海安普）；滤膜（PTFE Hydrophilic 0.22μm，中国上海安普）；一级水（蒸馏水）。氢氧化钠（）；L-半胱氨酸；四丁基硫酸氢铵；盐酸；碘甲烷。
2.2 实验方法
2.2.1 标准溶液的配制
称取50.0 g L-半胱胺酸盐，50.0 g乙二胺四乙酸二钠，用800 mL水溶解。用氢氧化钠溶液调节pH 10，用水定容至1000mL。称取10.00 mg代森锰锌标准品，用L-半胱氨酸和乙二胺四乙酸二钠溶液溶解，定容至10mL，作为储备液置于4℃冷藏保存。用L-半胱氨酸和乙二胺四乙酸二钠溶稀释成10 mg/L的工作液置于4℃冷藏保存。
2.2.3 样品处理
精确称量5.00g样品于50mL离心管，加入20mL L-半胱氨酸及乙二胺四乙酸二钠溶液，超声振荡15min，加入10mL二氯甲烷，混匀，离心3min。取上清液于50mL离心管中，加入2mL 0.4moL四丁基硫酸氢铵溶液，用pH计调节pH 7.5-7.7，加入100μL碘甲烷,放置20 min后，离心5min，备用。
用5mL甲醇和5mL水平衡活化HLB净化柱后，取1/2提取液上样，用5mL水淋洗，抽干。然后用10 mL甲醇溶液洗脱,接收洗脱液，旋蒸至近干。加入2mL乙腈+0.1%甲酸水（1+1）涡旋定容。过0.22μm滤膜，待测。
2.3液相色谱-串联质谱条件
2.3.1 液相条件
色谱柱: Agilent Eclipse Plus C18 RRHD （2.1 mm×100 mm, 1.8 μm）；流动相：0.1%甲酸水溶液(A)，乙腈（B）。流速: 0.30 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：2 μL。
2.3.2 质谱条件
ESI 正模式；Gas Temp: 325℃；Gas Flow: 10 L/min；Nebulizer : 45psi；Sheath Gas Tem: 350 ℃；Sheath Gas flow: 11 L/min。
3.结果与分析
3.1 质谱条件的优化
将代森锰锌配制成浓度为1mg/L的标准品，使用两通连接液相色谱与质谱，连续进样几次后，确定其母离子、子离子。ＭＲＭ方式下所选择的目标分析物特征离子见表1。
| Compound | Precursor Ion(m/z) | Product Ion
(m/z) | Dwell
times/ms | Fragmentor
voltage/V | Collision energy/eV | Cell Accelerator Voltage/V |
| Mancozeb | 241 | 193 | 20 | 81 | 1 | 3 |
| | 241 | 134 | 20 | 81 | 21 | 3 |
| | 241 | 117 | 20 | 81 | 8 | 3 |
有机相的浓度对于待测物的影响较大，用乙腈和甲酸水作为流动相。随着乙腈浓度的增大，分离时间变短，分离效果较好。通过优化，确定以表2的方式作为梯度洗脱条件，流动相A为0.1%甲酸水，流动相Ｂ为乙腈。目标物标准溶液（50 ug/L）的总离子流图和提取离子色谱图见图1。
表2梯度洗脱条件
Table 2Conditions of gradient elution
| 时间/min | 流动相A/% | 流动相B/% |
| 0.00 | 60 | 40 |
| 1.00 | 60 | 40 |
| 3.00 | 10 | 90 |
| 4.00 | 10 | 90 |
| 4.01 | 60 | 40 |
| 5.00 | 60 | 40 |
3.3 线性回归方程
将标准溶液稀释成浓度为10、50、100、200、500 μg/L溶液，按以上条件进行分析，记录色谱图。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性分析，得到代森锰锌的标准曲线方程Y=213.518997*x-516.797839，r2>0.999（如图2）。由样品前处理回收率和稀释倍数关系，定量限（LOD，S/N=10）100 ug/kg，检出限（LOD，S/N=3）为10ug/kg。
呈线性了
实验过程中出现过许多问题，提取液的配制不准确（PH值一定要准确）、pH调节范围不合适造成衍生不完全，这些问题的出现造成许多不必要实验，在以后对待类似实验时提供了借鉴的意义，同时也完善方法开发思路，与大家共勉。
应助达人
，被坑了，按照国标没有冰浴，最近看到台湾的资料发现有要求冰浴的，继续去实验去。
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