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动物源性食品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考（氟甲砜霉素）的测定

我是风儿

2018/10/31
鹤壁农检联合队

液质联用（LCMS）

动物源性食品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考（氟甲砜霉素）的测定
色谱柱：菲罗门 kinetex C18柱（100×2.1mm 2.6um）
试剂溶液: 甲醇水（3+7）：300 mL甲醇与700 mL去离子水混匀；
乙腈饱和正己烷：乙腈与正己烷等比例混合，取上层；
说明：下列所述标准工作液A、B为氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素混合标液
标准中间液：氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素1.0 μg/mL
内标中间液：D-CAP 1.0 μg/mL
标准工作液A（25 ng/mL）：吸取1.0 μg/mL标准中间液0.25 mL用30%甲醇水定容至10 mL，混匀(该溶液临用现配)；
内标工作液A（25 ng/mL）：吸取1.0 μg/mL内标中间液0.25 mL用30%甲醇水定容至10 mL，混匀(该溶液临用现配)；
标准工作液B(1 ng/mL)：吸取标准工作液A 0.4 mL用30%甲醇水定容至10 mL，混匀 (临用现配)。
上机标准曲线:分别移取0、0.1、0.2、0.4、1.0mL标准工作液A（25 ng/mL），1.0mL内标工作液A（25 ng/mL）于5个10mL容量瓶中，30%甲醇水定容至刻度，得标液浓度为0、0.25、0.5、1.0、2.5 ng/mL，内标溶度为2.5ng/mL。
附：标准曲线配制：外标中间液：氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素1.0 μg/mL

样品前处理：
准确称样5.00 g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中，添加氯霉素内标，加入0.5mL氨水，加入5 g 无水Na₂SO₄和20 mL乙酸乙酯，用均质器以10000 r/min的速度均质1 min，15 mL乙酸乙酯清洗均质头，加盖振摇，3500 r/min离心5 min，上清液转移至150 mL的棕色梨形瓶中，在40 ℃减压旋转蒸发至干，加入2 mL甲醇水（3+7）和2 mL 乙腈饱和正己烷溶解洗脱，高速离心分层，取下清液，用0.2 μm微孔有机滤膜过滤，上机测试。

氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考（氟甲砜霉素）的测定涉及标准汇总、比较见表1：

线性范围、线性方程
分别对氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准系列工作溶液进行测定，以标准溶液的浓度(ng/mL)与氘代氯霉素浓度的比值为横坐标，以标准溶液中被测组分峰面积与氘代氯霉素峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线或计算回归方程，具体结果见表2。

氯霉素（0.25ng/mL）、甲砜霉素(2.5ng/mL)、氟苯尼考（氟甲砜霉素）(2.5ng/mL)MRM图：

鸡肉样品测定MRM图：

鸡肉样品加标氯霉素（0.25ng/mL）、甲砜霉素(2.5ng/mL)、氟苯尼考（氟甲砜霉素）(2.5ng/mL)MRM图：

鸡肉样品加标0.1ug/kg氯霉素提取定量子离子151.9的信噪比：

鸡肉样品加标1.0ug/kg甲砜霉素提取定量子离子184.9的信噪比：

鸡肉样品加标1.0ug/kg氟苯尼考提取定量子离子336.0的信噪比：

注意事项：
1、每批样品检测应包含：标液曲线、试剂空白、样品空白、样品加标、样品。
2、加标回收：分别添加1 ng/mL标准工作液B 0.5 mL于空白样品中，氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素相当于0.1 μg/kg水平；
3、负离子模式，上机前如响应不够需清洗离子源或增加仪器平衡时间；
4、初测选适用基质的任一样品加标，如遇特殊基质（如饲料、血粉等粉末样品）称1.0 g，其余步骤同肉制品，定量下限与加标水平同时提高为氯霉素1.0 μg/kg，特殊基质应选用该样品做加标回收，复测时做平行样品，如初测浓度过高，复测时应加大曲线范围或者将样品稀释后上机，保证样品浓度在曲线范围内。

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weiqing

第1楼2018/10/31

应助达人

步骤蛮详细的。

0

检测老菜鸟

第2楼2018/11/01

应助达人

最后一步骤如果浓度高，稀释后上机咱们做过吗，我们都是用增加标曲点来做，没有试过稀释，如果可以，下回也试试稀释

0

简爱

第3楼2018/11/01

学习了，谢谢分享

0

问题123

第4楼2018/11/02

老师问您一下，最后的定容体积怎么计算，又有甲醇水和乙腈饱和正己烷。以2ml的甲醇水最终定容体积吗？

0

symmacros

第5楼2018/11/02

应助达人

很详细的方法介绍，根据实际情况调整方法。

1

我是风儿

第6楼2018/11/02

应助达人

是的，因为上层是正己烷层啊
问题123(v2857333)发表:老师问您一下，最后的定容体积怎么计算，又有甲醇水和乙腈饱和正己烷。以2ml的甲醇水最终定容体积吗？

0

我是风儿

第7楼2018/11/02

应助达人

谢谢朱老师的夸奖
symmacros(jimzhu)发表:很详细的方法介绍，根据实际情况调整方法。

0

我是风儿

第8楼2018/11/02

应助达人

那你们的工作曲线有多少个点？
检测老菜鸟(v3295053)发表:最后一步骤如果浓度高，稀释后上机咱们做过吗，我们都是用增加标曲点来做，没有试过稀释，如果可以，下回也试试稀释

0

检测老菜鸟

第9楼2018/11/02

应助达人

正常来说五个点，增加最多到七个
我是风儿(com.example.sj.xlf.forum.entity.ForumReplyItem$ReplyReferItem) 发表:null

0

我是风儿

第10楼2018/11/03

应助达人

有一次我们的实验室外审检查员说现在工作曲线要有六个点，可是我们找不到来源出处
检测老菜鸟(v3295053)发表:正常来说五个点，增加最多到七个

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