junxi2008
第1楼2019/11/27
可参考下资料:
高效液相色谱法测定红曲酒糟发酵物中γ-氨基丁酸的含量;
柱前衍生高效液相色谱法测定氨基酸;
还有很多资料的,可以自己去查查。
OPA在2-巯基乙醇存在下与第一级氨基酸迅速反应生成1-硫代-2-烷基异吲哚,加成物可产生荧光,在紫外区有较强吸收。它可做高灵敏度荧光检测。又可做一般的紫外吸收检测。紫外检测线性范围为10~200pmol。荧光为0.8~15pmol。OPA本身不干扰分离检测,不必除去过量试剂,色谱图基线也比较平稳。
采用邻苯二甲醛(OPA)作为柱前衍生化试剂,因为该试剂本身具有以下优点:①OPA本身不发荧光,色谱分离中不会形成干扰峰;②OPA与β-巯基乙醇试剂连用和一级氨基酸的反应迅速,易于实现在线自动化;③柱寿命长,且进柱子进行分析时不需要特定的配套色谱柱。当然该柱前衍生化试剂本身也具有一些不足,该衍生试剂具有以下几点不足:①OPA试剂本身容易氧化降解(由无色透明变成微黄色),造成实际工作试剂保存困难。OPA的不稳定主要是因为它容易被空气中的氧气所氧化,从而发生降解。配好的OPA试剂在4℃黑暗条件下可稳定存放1周,较好地解决了OPA试剂易降解的问题;②OPA与氨基酸的衍生产物也不稳定,衍生后需立即进样分析。
气质新手学习中
第2楼2023/07/21
求问大佬,我用液相分析氨基酸,使用了OPA衍生剂,准确称取50 mg的OPA,溶于0.5 mL的甲醇,加入4.5 mL的0.4 M的硼酸-硼砂缓冲液(pH 9.5),最后加入0.25 mL的β-巯基乙醇,衍生剂过了0.22微米的有机膜,但是每分析一个样,柱压就会升高2——3bar。已经排除是其他原因,就是出现在OPA衍生剂上面。请求为什么会这样?以及该如何解决?