仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯

谁能告诉我opa衍生法的具体操作,及各种注意事项吗,包括试剂,用量尽量详细点

测试版面

  • 谁能告诉我opa衍生法的具体操作,及各种注意事项吗,包括试剂,用量尽量详细点
    +关注 私聊
  • junxi2008

    第1楼2019/11/27

    可参考下资料:
    高效液相色谱法测定红曲酒糟发酵物中γ-氨基丁酸的含量;
    柱前衍生高效液相色谱法测定氨基酸;

    还有很多资料的,可以自己去查查。

    OPA在2-巯基乙醇存在下与第一级氨基酸迅速反应生成1-硫代-2-烷基异吲哚,加成物可产生荧光,在紫外区有较强吸收。它可做高灵敏度荧光检测。又可做一般的紫外吸收检测。紫外检测线性范围为10~200pmol。荧光为0.8~15pmol。OPA本身不干扰分离检测,不必除去过量试剂,色谱图基线也比较平稳。
    采用邻苯二甲醛(OPA)作为柱前衍生化试剂,因为该试剂本身具有以下优点:①OPA本身不发荧光,色谱分离中不会形成干扰峰;②OPA与β-巯基乙醇试剂连用和一级氨基酸的反应迅速,易于实现在线自动化;③柱寿命长,且进柱子进行分析时不需要特定的配套色谱柱。当然该柱前衍生化试剂本身也具有一些不足,该衍生试剂具有以下几点不足:①OPA试剂本身容易氧化降解(由无色透明变成微黄色),造成实际工作试剂保存困难。OPA的不稳定主要是因为它容易被空气中的氧气所氧化,从而发生降解。配好的OPA试剂在4℃黑暗条件下可稳定存放1周,较好地解决了OPA试剂易降解的问题;②OPA与氨基酸的衍生产物也不稳定,衍生后需立即进样分析。

2
    +关注 私聊
  • 气质新手学习中

    第2楼2023/07/21

    求问大佬,我用液相分析氨基酸,使用了OPA衍生剂,准确称取50 mg的OPA,溶于0.5 mL的甲醇,加入4.5 mL的0.4 M的硼酸-硼砂缓冲液(pH 9.5),最后加入0.25 mL的β-巯基乙醇,衍生剂过了0.22微米的有机膜,但是每分析一个样,柱压就会升高2——3bar。已经排除是其他原因,就是出现在OPA衍生剂上面。请求为什么会这样?以及该如何解决?

    junxi2008(junxi2008) 发表:可参考下资料:
    高效液相色谱法测定红曲酒糟发酵物中γ-氨基丁酸的含量;
    柱前衍生高效液相色谱法测定氨基酸;

    还有很多资料的,可以自己去查查。

    OPA在2-巯基乙醇存在下与第一级氨基酸迅速反应生成1-硫代-2-烷基异吲哚,加成物可产生荧光,在紫外区有较强吸收。它可做高灵敏度荧光检测。又可做一般的紫外吸收检测。紫外检测线性范围为10~200pmol。荧光为0.8~15pmol。OPA本身不干扰分离检测,不必除去过量试剂,色谱图基线也比较平稳。
    采用邻苯二甲醛(OPA)作为柱前衍生化试剂,因为该试剂本身具有以下优点:①OPA本身不发荧光,色谱分离中不会形成干扰峰;②OPA与β-巯基乙醇试剂连用和一级氨基酸的反应迅速,易于实现在线自动化;③柱寿命长,且进柱子进行分析时不需要特定的配套色谱柱。当然该柱前衍生化试剂本身也具有一些不足,该衍生试剂具有以下几点不足:①OPA试剂本身容易氧化降解(由无色透明变成微黄色),造成实际工作试剂保存困难。OPA的不稳定主要是因为它容易被空气中的氧气所氧化,从而发生降解。配好的OPA试剂在4℃黑暗条件下可稳定存放1周,较好地解决了OPA试剂易降解的问题;②OPA与氨基酸的衍生产物也不稳定,衍生后需立即进样分析。

0
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
举报帖子

执行举报

点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...