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生物样品前处理问题

xmgulong

2020/02/16

最近做药动，对于样品前处理的沉淀蛋白法不太理解。用与水项混溶的有机溶剂沉淀蛋白时，比如说用乙腈，我取500ul血浆，加入500ul乙腈，涡旋离心后要取上清进样，但是上清的总体积我不知道，取一定量上清进样的话，提取回收率该怎么算呢？上清液的总体积用不用知道呢？请高手指点迷津。
例：取肝素抗凝血浆600uL，置10mL具塞离心试管中，依次加入内标溶液50ul和乙腈3mL，涡旋混合，离心，分取上清，于40℃氮气流下吹干，残渣加入流动相80ul，涡旋，高速
离心(16000rpm/min)10min，取上清液20uL，注入高效液相色谱仪。
这个过程中“分取上清”是把上清液完全取出吗？并且要确定总的上清量吗？如果不是的话，那提取回收率该怎么算呢？

xmgulong

第1楼2020/02/16

不需要知道上清的总量，比如你乙腈加入的是3mL，你上清可以就取2.5上清就好了，吹干，复溶，进样。提取回收率在液相里就是用处理后得到的峰面积比上标液的峰面积，就行了。
比如空白血浆100uL，加入标液50uL，那这就相当于标液被稀释了2倍。算提取回收率的时候你处理后得到的峰面积要乘以2之后再闭上标液的峰面积。

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