样品含量测定发现问题？

987321654

2020/02/22

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测试版面

1 色谱条件
色谱柱：Promosil C18（250×4.6mm，5μm，；柱号：PM952505-0）；流动相：0.1%磷酸溶液-乙腈 (87：9)；流速：1.0ml/min；检测波长：207nm；柱温：25℃；进样量：10ul。理论塔板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于3000。
2 供试品与对照品溶液的制备
2.1 精密称取105℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品10.81mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。
2.2 精密量取本品溶液2ml，置具塞锥形瓶中，精密加入氯仿25ml，浓氨试液2ml，称定重量，摇匀，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，摇匀，迅速滤过。精密量取续滤液5ml置蒸发皿中，加0.1%盐酸甲醇溶液1ml，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解并定量移至10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
3 测定方法
精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10u1，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，以外标法计算含量。
测定的对照品峰面积为：对照品的含量为98%3361921
样品峰面积为：
1102362.938
面积外标法的计算公式为：样品峰面积×对照品取样量（10.81mg）×对照品标示量（98%）×样品稀释倍数｛2/（25＋2＋2）×5/10=29倍｝÷对照品峰面积÷样品取样量（2ml）÷对照品稀释倍数（100倍）
通过上述公式计算处理后的样品含量为0.503mg/ml，但是我认为这只是处理后的样品含量，再根据样品的处理过程计算出样品的真正含量应该为：0.503×10×（2+25+2）÷5÷2=14.587mg/ml。
4 根据测得的结果我设计了线性试验：取对照品配制成浓度为2.0115mg/ml左右，分别精密量取0.5ml，1ml，2ml，4ml，8ml，10ml的对照品溶液，用甲醇定容至10ml容量瓶中，分别进样10ul，以峰面积Y为纵坐标，进样量X为横坐标进行线性回归计算，得回归方程为：Y=3.2×107＋542313.9（r=0.9999），表明盐酸麻黄碱进样量在1.01～20.115ug范围内与峰面积呈现良好的线性关系。
5 加样回收试验
我根据上述结果制定了如下的加样回收试验：精密量取1ml样品溶液，精密加入7.3mg对照品，然后按照供试品溶液制备方法制备，按照上述色谱条件测定。
我的上述试验过程及设计方法是否有什么不合理之处，请大家帮忙分析一下。

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第1楼2020/02/22

看了帖子也不知道楼主所说的问题是指什么？

从楼主的溶液配置过程的描述来看，关于计算的描述有些复杂，试着倒推一下楼主所述溶液的浓度：

进液相分析的样品溶液浓度=1102362.938（样品峰面积）*[10.81/100 ]（mg/mL对照品浓度）*98%（对照品含量）/3361921（对照品峰面积）=0.0347 mg/mL

续滤液浓度=进液相分析的样品溶液浓度*10/5=0.0694 mg/mL

稀释前的样品溶液=续滤液浓度*（2+25+2）/2=1.0074 mg/mL

也就是说你的样品真正含量为 1.0074 mg/mL。