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出峰时间提前至5分钟左右？不知道是怎么造成？

carnivore

2020/02/23

新药分析梯度洗脱出峰时间提前至5分钟左右出峰

各位前辈，我最近接到一项新的实验，委托方提供的方法是甲醇：水=10:90，我们的液相色谱是反向色谱，C18柱 250mm*5mm 4.6um。由于该方法出峰时间长，理论塔板数低（三千八至四千左右），我将其方法换为乙腈，梯度洗脱（10%-30%-10%：0min-8min-12min-15min stop），出峰时间提前至5分钟左右，TP一万多，但是出峰前会上升类似于漂移，但出峰完基线在十分钟左右才开始正常漂移，峰不拖尾。请教大家如何解决?由于是新药，我们不知道其化学结构。

carnivore

第1楼2020/02/23

甲醇：水=10:90
甲醇换乙腈，梯度洗脱（10%-30%-10%：0min-8min-12min-15min stop）
首先，甲醇极性比乙腈大，改用乙腈后，流动相极性减少，保留时间略提前；
其次，梯度10%-30%，0min-8min，随有机相增大流动相极性较少，保留时间提前。

走梯度，流动相比例变化较剧烈的时候，基线会略有上漂。可以试试适当调低8min时乙腈比例，或调长乙腈达30%时所需时间。

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