原文标题:记一次食用油中抗氧化剂TBHQ假阳性判定
原文作者:户江涛(黑龙江省农垦科学院测试化验中心)
油脂中加入适量抗氧化剂,可抑制微生物生长繁殖,从而有效防止油脂因空气中的氧化发生酸败而引起变质,延长保质期。特丁基对苯二酚(TBHQ)属酚类油溶性抗氧化剂,特别适用于植物油中,是色拉油、调和油等首选的抗氧化剂。相当多的动物实验表明,抗氧化剂具有一定的毒副作用,因此我国食品安全国家标准 食品添加剂使用标准GB 2760-2014(04.007)规定,TBHQ可用于食用油脂、油炸制品、坚果罐头、方便面、饼干、腌制肉制品、膨化食品等,最大使用量为0.2 g/kg。
前段时间单位收到了某企业送来的的包括葵花籽油、大豆油、花生油在内的十多个食用油样品,需要检测特丁基对苯二酚(TBHQ)、叔丁基-4-羟基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)、没食子酸丙酯(PG)四种抗氧化剂,采用的方法标准是《SN/T 1050-2014 出口油脂中抗氧化剂的测定 高效液相色谱法》。
前处理过程完全按照该标准:称取1 g样品于离心管中,加入5 mL乙腈饱和的正己烷(用于溶解样品),涡旋混匀2 min使样品完全溶解,再加入10 mL正己烷饱和的乙腈(用于提取样品中抗氧化剂),涡旋混合1 min,倒入分液漏斗中,静置分层,将下面乙腈层转入旋转蒸发瓶中。再按照上述操作用正己烷饱和乙腈提取两次,合并乙腈于旋转蒸发瓶内。在40℃下,将乙腈提取液旋转蒸发至近干,将浓缩液转至刻度管中,用异丙醇定容至2 mL,过0.22 um有机滤膜后供UPLC分析。
液相色谱条件:色谱柱:Waters BEH C18(1.7 μm,50mm×2.1mm);柱温:30℃;流速:0.4 mL/min;进样量:2 μL;检测波长:280 nm;流动相A:乙腈;流动相B:0.1%的甲酸水溶液。梯度洗脱程序:0~0.5min,20% A;0.5~6. 0 min,20%~100% A;6. 0 ~7. 0 min,100%A,7 ~7.1min,100% A~20% A,7.1 ~8.0min 20% A。
图1 四种抗氧化剂标准溶液色谱图(5 ug/mL)
图2 某四级葵花籽油样品色谱图
图3 某一级葵花籽油样品色谱图
图4 四级葵花籽油样品稀释50倍后加入5 ug TBHQ的色谱图
某四级葵花籽油样品色谱图在2 min处有很大的色谱峰(见图2),和TBHQ标准品(图1)进行比对,发现保留时间重合的非常好,经计算该样品TBHQ含量为0.5 g/kg,超过了GB 2760关于TBHQ的限量值0.2 g/kg,样品平行性非常好,跟随样品的质控添加平均回收为93%,完全符合该标准要求。由于涉及不合格样品判定,出具报告时需要更加谨慎。该标准前处理方法比较简单,特别是该“超标样品”油颜色比较深,其它颜色比较浅的一级、二级食用油等样品TBHQ则为未检出,TBHQ保留时间处确实没有色谱峰(图3),怀疑是不是该样品由于颜色比较深可能前处理过程中没有去处色素等杂质干扰,造成[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱[/url]出现假阳性的情况。
一般出现这种情况,如果还用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱[/url]法进行判定的话,一般可以选择以下三种方式:①用二极管阵列检测器进行全波长扫描,看标准品和阳性样品TBHQ吸收波长是否一致;②改变流动相梯度程序,看标准品和阳性样品TBHQ保留时间变化是否一致;③采用标准加入法,即在阳性样品中加入一定量TBHQ标准品,看色谱峰重合性和峰面积增加是否符合理论值。由于单位这台UPLC没有配置二极管阵列检测器,①这种方式实现不了;通过改变流动相梯度程序,发现阳性样品TBHQ保留时间依然和标准品重合性很好,②也判定不出是否是“假阳性”;采用③方式,分别在两个阳性样品中加入TBHQ标准品,色谱图见图4,TBHQ峰型完好没有出现分叉,峰面积增加值和理论加入值基本吻合,也不能做“假阳性”判定。
基于以上结果,能否做出不合格判定?样品实际检测结果如何?
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