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求助pmp衍生化测多糖的问题

  • Ins_232a159b
    2022/05/17
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 我现在做标准单糖的PMP衍生化,用HPLC检测,用的是C18柱,对照品是葡萄糖、甘露糖、半乳糖,木糖和半乳糖醛酸,出现的问题是:各单糖对照品在同一个时间出峰,混和各单糖标品后也只出现一个峰(进了一针混标),尝试了调流动相比例,没有一点作用,几天后用空白溶剂进了一针,发现全是溶剂pmp的峰(就是下图的峰,不管样品、单标还是混标全都是这样的一个峰)!!!整个人直接裂开,实验进行不下去,求各位做过的大佬帮帮!!!!!


    衍生方法:吸取混合标准品溶液400μl,加0.5mol/L的PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)甲醇溶液与0.3mol/L的氢氧化钠溶液各400μl,混匀,70℃水浴反应100分钟。再加0.3mol/L的盐酸溶液500μl,混匀,用三氯甲烷洗涤3次,每次2ml,弃去三氯甲烷液,水层离心后,取上清液注入液相色谱仪,测定。
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  • wuyuzegang

    第1楼2022/05/18

    应助达人

    既然无法分开,如果排除标准品的原因后说明色谱条件有待优化,可以参考下面文献中的方法试试

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  • 安平

    第2楼2022/05/18

    应助达人

    看上去是衍生并没有成功所致。 即衍生和不衍生,结果相同。


    建议考虑一下衍生条件,衍生试剂是否不良。

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  • Ins_232a159b

    第3楼2022/05/19

    谢谢,我昨天重做了一下衍生化,混标终于出峰了,但是现在有一个问题,对照品的峰太低了(主要是pmp的峰太高太高了),我昨天用氯仿萃取了5次,有50min了,但是pmp的峰还是这样老高老高,我想问一下还有什么办法吗

    安平(byron1111) 发表:看上去是衍生并没有成功所致。 即衍生和不衍生,结果相同。

    建议考虑一下衍生条件,衍生试剂是否不良。

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  • Ins_232a159b

    第4楼2022/05/19

    谢谢

    wuyuzegang(dahua1981) 发表:既然无法分开,如果排除标准品的原因后说明色谱条件有待优化,可以参考下面文献中的方法试试

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  • Ins_4c69e706

    第5楼2022/08/23

    您好,我也再做pmp衍生化。我也遇到了一些问题,想跟您交流一下,传授一下经验。万分感谢!

    我现在一直衍生化不成功,快要崩溃了。衍生化后的单糖溶液有粉红色,还有无色的。请问出现这个现象是正常的吗?

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  • 端木

    第6楼2022/10/10

    现在有没有衍生化成功?

    Ins_4c69e706(Ins_4c69e706) 发表:您好,我也再做pmp衍生化。我也遇到了一些问题,想跟您交流一下,传授一下经验。万分感谢!

    我现在一直衍生化不成功,快要崩溃了。衍生化后的单糖溶液有粉红色,还有无色的。请问出现这个现象是正常的吗?

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  • valorb

    第7楼2022/10/10

    糖的衍生应该有很多文献,查查

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  • dadgoh

    第8楼2022/10/11

    应助达人

    衍生试剂要求新鲜,既现配现用。

    端木(icetrob) 发表:现在有没有衍生化成功?

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  • 端木

    第9楼2022/10/12

    现配现用还是没有衍生成功,不知道为什么

    dadgoh(dadgoh) 发表:衍生试剂要求新鲜,既现配现用。

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  • Ins_ff77a242

    第10楼2022/10/29

    我想问一下 用葡萄糖衍生后 不同浓度的葡萄糖 为啥跑出峰的位置不一样 您一般衍生多久 衍生过程有什么要注意的吗

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