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求助！求助！????PITC—HPLC法测定氨基酸标准品，杂峰太多，无法定性定量

Ins_aecc4740

2022/09/15

液相色谱（LC）

单个标准品浓度是10mg/ml，衍生方法是200ul单标品＋400ul 1mol/l三乙胺—乙腈溶液＋400ul 0.1mol/l PITC—乙腈溶液，室温下放置1h，再加入800ul正己烷萃取，过滤膜进样。色谱柱为 Diamonsil-C18(2) (4.6×250 mm，5μm)，流动相A为水:乙腈（20:80）、流动相B为 1mol/L 乙酸钠（pH=6.37）:乙腈（93:7）,在柱温为室温、UV 波长254nm 下梯度洗脱，进样量20μL。梯度洗脱程序如图1和图2（两个梯度都跑过，结果无差别），梯度1结果是图2为0.1mol/l HCL空白对照，图3为单标甘氨酸，后证实标注的峰不是甘氨酸而是盐酸。我也尝试过在45℃和60℃干燥箱中衍生，结果无差别。各位大神有没有更好的衍生条件，衍生后杂峰偏多，如何看哪个是氨基酸的峰？梯度洗脱程序更改了一些，但色谱图变化不明显。

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xiaolanzi5

第1楼2022/09/15

应助达人

最高的峰不是目标峰吗？您的标准品浓度是1万ppm，正己烷萃取后理论上是2500ppm，这么高的浓度，响应应该很高。建议您再做个低浓度已知浓度目标物的衍生进样，看看哪个峰差不多成比例，那个峰就可能是目标峰。

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液相色谱小白

第2楼2022/09/15

这个图片位置有差别，第一个色谱图是加了样的，第二个是空白

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液相色谱小白

第3楼2022/09/15

奇怪的是，空白跑的色谱图也有大峰，所以怀疑那个大峰是杂质，不是样品。
xiaolanzi5(xiaolanzi5) 发表:最高的峰不是目标峰吗？您的标准品浓度是1万ppm，正己烷萃取后理论上是2500ppm，这么高的浓度，响应应该很高。建议您再做个低浓度已知浓度目标物的衍生进样，看看哪个峰差不多成比例，那个峰就可能是目标峰。

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液相色谱小白

第4楼2022/09/15

衍生温度有具体的要求吗？准备试试水浴50°衍生1h
xiaolanzi5(xiaolanzi5) 发表:最高的峰不是目标峰吗？您的标准品浓度是1万ppm，正己烷萃取后理论上是2500ppm，这么高的浓度，响应应该很高。建议您再做个低浓度已知浓度目标物的衍生进样，看看哪个峰差不多成比例，那个峰就可能是目标峰。

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