水中抗生素类药物的测定
前言
近日，一篇关于《长江流域抗生素污染调查》的报道，长江流域抗生素浓度偏高，水生态系统受到破坏，相关调查显示，长三角约40%孕妇尿液中检出抗生素，近80%儿童尿液中检出兽用抗生素，部分检出抗生素已在临床中禁用，有可能严重损害人体免疫力。因此抗生素类药物的检测与监控越发重要。
对于水中抗生素类药物检测，固相萃取技术越来越多地得到应用，本文使用全自动固相萃取系统进行水源水中四环素类、头孢类和磺胺类的萃取净化，并用高效液相色谱进行检测，通过全自动固相萃取系统建立的方法加标回收率良好，适合水源水中抗生素类药物的检测。
关键词
头孢类； 四环素；磺胺类；抗生素
1、 水中四环素类抗生素的检测方法
1仪器设备及试剂
1.1仪器设备
SPE1000全自动固相萃取系统；
M64 高通道平行浓缩仪；
LC600 二元高压梯度高效液相色谱；
固相萃取柱HLB 500 mg/6 ml 。
1.2试剂
甲醇、乙腈（色谱纯 FISHER Chemical）；
草酸、盐酸（分析纯）；
Mcllvaine 缓冲溶液：将1000ml 0.1mol/L 的柠檬酸溶液与625mL 0.2mol/L 磷酸氢二钠混合；
0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液：称取60.5g 乙二胺四乙酸二钠放于1625mL Mcllvaine 缓冲溶液中，溶解，摇匀；
土霉素、四环素、金霉素标准物质：纯度>=95%；
土霉素、四环素、金霉素混合标准储备溶液：准确称取提土霉素、四环素、金霉素各 10mg，用甲醇定容至100ml 容量瓶中（100mg/L，甲醇）；
2实验过程
2.1样品预处理
采集每500mL 水源水作为一个样品，装入SPE1000样品瓶中 ，加入250mgEDTA-Na2，20%盐酸调节PH约为2 。
2.2 SPE富集及浓缩
按照图1所示方法进行样品的SPE净化。
洗脱液收集到收集瓶中，用M64 40℃ 5psi浓缩后，用流动相定容至1mL，涡旋混匀，待检测。
图1土霉素、四环素、金霉素固相萃取方法
2.3高效液相色谱检测条件
色谱柱：C18，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或性能相当者；
流动相：乙腈：甲醇：0.01mol/L草酸溶液=2:1:7；
流速：0.5mL/min；
紫外检测波长：214nm；
柱温：30℃；
进样量：20μL。
3实验结果
3.1土霉素、四环素、金霉素混标液相色谱图
图2为三种混标液相色谱图。
图2 5mg/L土霉素、四环素和金霉素液相色谱图
3.2空白样品液相色谱图
图3为空白样品液相色谱图。
图3 空白样品液相色谱图
3.3加标回收率
图4为加标样品液相色谱图，加标回收率结果如表1所示。
图4 加标样品液相色谱图
表1 加标回收率结果
序号
| 化合物
| 添加水平（mg/L） | 平均值% | RSD% |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
1 | 土霉素 |
85.5
|
74.4
|
78.5
| 83.7 | 80.6 | 72.6 | 79.3 | 6.4 |
2 | 四环素 | 81.0 | 89.2 | 83.1 | 86.5 | 88.3 | 80.3 | 84.7 | 4.5 |
3 | 金霉素 | 78.3 | 86.9 | 88.1 | 83.7 | 76 | 84.1 | 82.9 | 5.8 |
4 结果与讨论
本文使用全自动固相萃取系统进行水源水中土霉素、四环素、金霉素的净化，经氮吹浓缩后用高效液相色谱进行检测，加标回收率为79.3%-84.7%，RSD为4.5%-6.4%，适合水源水中土霉素、四环素、金霉素的检测。
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