前言
4,4'-二氨基联苯俗称“联苯胺”，分子式为(C6H4NH2)?，系联苯的衍生物之一，为IARC第一类致癌物，有强烈的致癌作用，是染料合成的中间体，在染色的棉纺织品中容易超标。
联苯胺是重要的染料中间体，联苯及其衍生物广泛用于各种染料合成，其种类多达250种。4,4'-二氨基联苯及其盐都是有毒且会致癌的物质，进入体内，引起皮炎，刺激黏膜，损害肝和肾脏，且会造成膀胱癌和胰腺癌 。联苯胺的浓度只要达到6.7ppb，对人体就有致癌的风险，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，4,4'-二氨基联苯（联苯胺）在一类致癌物清单中，因此，建立一套快速处理、富集水中联苯胺并检测的方法是非常有必要的。本文使用全自动固相萃取系统对水中联苯胺进行固相萃取富集，用高效液相色谱仪进行检测。
本文参考“HJ 1014-2019 水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法”采用SPE1000配置两种不同类型的固相萃取柱，测试其对联苯胺的回收效果，经过实验， SCX固相萃取柱的回收率在75.6%~83.2%之间，重现性RSD在2.8%~5.2%之间；HLB固相萃取柱的回收率在81.0%~91.9%之间，重现性RSD为6.0%。两种萃取柱均得到较好的回收率和良好的重现性，说明SPE-1000全自动固相萃取系统可靠稳定，适用于大体积水中的联苯胺样品前处理。
关键词：联苯胺，SPE-1000全自动固相萃取系统，高效液相色谱法（荧光检测器）
1 SCX萃取柱实验过程
1.1仪器与试剂
SPE-1000全自动固相萃取系统；
LC600高压高效液相色谱仪；
联苯胺，＞99.5%；
甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；甲酸（分析纯）；乙酸（分析纯）；
SCX固相萃取柱规格；
自来水；超纯水。
1.2混合标准工作液的配制
取一定量的联苯胺标品于10mL容量瓶中，用甲醇定容，浓度为1000 μg/mL,用甲醇稀释成1 μg/mL标准工作液，用甲醇水溶液（V:V=1:1）依次配置成浓度分别为5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L的混合标准工作液。
1.3试验方法
1.3.1样品准备
取150 mL水样，加入8 mg硫代硫酸钠，超声10 min，用盐酸或者氢氧化钠将水样调至PH=5-6（蒸馏水无需调节PH），在分别加入60 μL、150 μL的标准工作液，使待测水样中联苯胺的加标浓度分别为0.40μg/L，将样品混匀待处理。
1.3.2 固相萃取及浓缩
按照图1所示的方法进行SPE-1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，进行30℃氮吹至1 mL，水定容至2 mL，待检测。
图1 水中联苯胺的SPE富集方法
1.3.3 HPLC测定水中联苯胺
色谱柱： C18，5μm，4.6mm*150mm；
波长：激发波长：292 nm，检测波长395 nm；
流速：1.0mL/min；
进样量：20μL；
流动相：乙酸铵：乙腈=85:15（0.05%甲酸）
2试验结果
2.1水中联苯胺色谱图
2.1.1水中联苯胺标品色谱图
图2为取30 μL的混合标准工作液用甲醇：水（1：1）定容到1.0 mL检测，联苯胺标品出峰色谱图，出峰时间分别为6.1min。
图2 联苯胺标品出峰色谱图
2.1.2水中联苯胺加标样品色谱图
图3联苯胺加标样品出峰色谱图，出峰时间为6.1min，
图3联苯胺加标样品出峰色谱图
2.4 联苯胺线性
联苯胺线性如下图4。
图4联苯胺线性图
2.3 HPLC测定水中联苯胺回收率
HPLC测定蒸馏水中联苯胺回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率均在75.6%~83.2%之间，重现性RSD为2.0%。
表1 蒸馏水中联苯胺的回收率（加标浓度0.4 μg/L）
名称 编号
| 回收率（%） | 平均 (%)
| RSD
|
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
联苯胺 | 78.7 | 80.0 | 79.6 | 80.1 | 81.9 | 83.0 | 80.6 | 2.0 |
HPLC测定自来水水中联苯胺回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率均在78.7%~83.2%之间，重现性RSD在6.4%。
表1 自来水中联苯胺的回收率（加标浓度0.4 μg/L）
名称 编号
| 回收率（%） | 平均 (%)
| RSD
|
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
联苯胺 | 80.3 | 79.8 | 80.9 | 83.2 | 94.2 | 84.4 | 83.8 | 6.4 |
3 HLB萃取柱试验过程
3.1仪器与试剂
SPE-1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；
LC600 一元高压高效液相色谱仪（莱伯泰科公司）；
联苯胺，＞99.5%，远航试剂厂；
甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；甲酸（分析纯）；乙酸（分析纯）；
HLB固相萃取柱（沃特世）
自来水，超纯水。
3.2标准工作液的配制
取一定量的联苯胺标品于10mL容量瓶中，用甲醇定容，浓度为1000 μg/mL，用甲醇稀释成1 μg/mL标准工作液，用甲醇水溶液（V:V=1:1）依次配置成浓度为30 μg/L的混合标准工作液。
3.3试验方法
3.3.1样品准备
取150 mL自来水样品，加入8 mg硫代硫酸钠，超声10 min，用盐酸或者氢氧化钠将水样调至PH=6~9，在分别加入60 μL的标准工作液，使待测水样中联苯胺的加标浓度分别为0.40μg/L，将样品混匀待处理。
3.3.2 固相萃取及浓缩
按照图5所示的方法进行SPE-1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，进行32℃氮吹至1 mL，水定容至2 mL，待检测。
图5 水中联苯胺的SPE富集方法
3.3.3 HPLC测定水中联苯胺
色谱柱： C18，5μm，4.6mm*150mm；
波长：激发波长：292 nm，检测波长395 nm；
流速：1.0mL/min；
进样量：20μL；
流动相：乙酸铵：乙腈=85:15（0.05%甲酸）
4试验结果
4.1水中联苯胺色谱图
4.1.1水中联苯胺标品色谱图
图6为取30 μL的混合标准工作液用甲醇：水（1：1）定容到1.0 mL检测，联苯胺标品出峰色谱图，出峰时间分别为6.6min。
图6 联苯胺标品出峰色谱图
4.1.2水中联苯胺加标样品色谱图
图7联苯胺加标样品出峰色谱图，出峰时间为6.6min，
图7联苯胺加标样品出峰色谱图
4.2 HPLC测定水中联苯胺回收率
HPLC测定自来水中联苯胺回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率均在81.0%~91.9%之间，重现性RSD为6.0%之间。
表1 自来水中联苯胺的回收率（加标浓度0.4 μg/L）
名称 编号
| 回收率（%） | 平均 (%)
| RSD
|
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
联苯胺 | 81.9 | 91.9 | 83.2 | 91.5 | 91.1 | 81.0 | 86.8 | 6.0 |
5结论与讨论
1 从实验效果上来看，两种萃取柱均满足实验要求，可任意选择其中一种；
2 联苯胺属于二元弱碱，在使用阳离子交换柱时，将样品PH调至弱酸性，有利于固相萃取柱对于目标物的吸附；
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