仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
1
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
质谱
>
液质联用(LCMS)
>
帖子详情
APOE(载脂蛋白E)不同表型分型
Ins_3606fb94
2023/02/08
私聊
液质联用(LCMS)
APOE
(载脂蛋白
E
)不同表型分型
背景
载脂蛋白E(
apolipoprotein E, ApoE
)作为脂质转运蛋白和低密度脂蛋白受体的主要配体,在胆固醇代谢和心血管疾病中发挥重要作用。
ApoE
有多种异构体,即
ApoE2
、
ApoE3
和
ApoE4
,分别由
APOE
的等位基因 ε
2
,ε
3
和ε
4
来编码;
APOE4
等位基因是阿尔茨海默病的主要危险因素,血清
ApoE
增高与心血管疾病死亡率增加有关,而降低则与
AD
相关死亡率增加有关;
这些研究发现是基于免疫法,如免疫透射比浊法。但基于免疫法的
apoE
的研究数据差异较大;而基于
液相色谱
串联质谱法(
LC-MS
/MS
)的研究数据一致程度较高;
LC-MS
/MS
在定义被分析物和抗干扰方面具有优势,且在血清载脂蛋白的绝对定量上已有较为成熟的应用。
实验方法
1
.
样品制备
1.1 APOE
混合轻标
mix
线性
1
溶液配制:
稀释剂:
0.1%SDC
作为稀释剂
取浓度为
10 ng/
μ
L
的
APOE1234
各轻标肽段溶液
10
μ
L
至于离心管中(共
40
μ
L
),再加入
10
μ
L
稀释剂,混合成为
APOE
混合轻标
mix
线性溶液起始浓度最高点:
2 ng/
μ
L
,共
50
μ
L
;
从
APOE
混合轻标
mix
线性溶液起始浓度
2 ng/
μ
L
继续往下梯度稀释,
2000 pg/
μ
L
、
1000 pg/
μ
L
、
500 pg/
μ
L
、
200 pg/
μ
L
、
100 pg/
μ
L
、
50 pg/
μ
L
、
20 pg/
μ
L
,以上
7
各浓度点作为
APOE
混合轻标
mix
线性
1
;
1.2 APOE
混合重标
mix
溶液配制:
取浓度为
10 ng/
μ
L
的
APOE1234
各重标肽段溶液
10
μ
L
至于离心管中(共
50
μ
L
),再加入
50
μ
L
稀释剂,混合成为
APOE
混合重标浓度最高点:
1 ng/
μ
L
,共
100
μ
L
;
将
APOE
混合重标浓度最高点稀释
10
倍至终浓度为
200 pg/
μ
L
作为混合重标
mix
,共
500
μ
L
;
1.3
配制
APOE
混合线性标曲梯度:
稀释剂:
0.1%SDC
作为稀释剂
取
APOE
混合轻标
mix
线性
1
各浓度点
10
μ
L+
混合重标
mix10
μ
L
,加入
40
μ
L
稀释剂,涡旋混匀,总体积为
60 μL
;
2
仪器方法
2.1
质谱检测
条件
Column:
ChromCore AQ C18 1.8
μ
m
,
2.1
×
100 mm
Mobile Phase:
A) 0.1%FA-H2O
B) 0.1%FA-ACN
Gradient:
t (min)
%A
%B
0
95
5
1
90
10
10
80
20
10.5
60
40
11
10
90
13
10
90
13.5
95
5
15
95
5
Flow Rate:
0.3 mL/min
Temperature:
40
℃
Injection:
10
μ
L
MS:
TSQ Altis
三重四级杆质谱采用
SRM
模式进行检测,检测周期
15 min
;
Sample:
APOE
(载脂蛋白
E
)
2.2 APOE
标样检测条件
3
实验结果
3.1 APOE
标样检测结果
3.2 APOE
标样检测结果
-
线性范围及内标重现性
3.3
实际样品检测结果
4
讨论与总结
简单地说,本研究使用了
APOE1/2/3/4
作为定量肽段,绝对定量方法使用合成的同位素标记肽作为内标物,检测样品中目标肽段的浓度;
结果表明,本实验室优化的前处理方法可尽可能实现该类肽段的释放,回收率达到
50-60%
;
更重要的是,在实际样本的检测中,根据
APOE1/2/3/4
四条肽段的出现情况,可以得出实际血浆提供者的
APOE
基因型,此结果已经与基因检测结果进行核对,且成功率达到
100%
;
公司名称:
南京品生医疗科技有限公司
色谱柱信息:
ChromCore AQ C18 1.8
μ
m, 2.1
×
100mm
分
该帖子已被
版主-nankingee
加5积分,加2经验;加分理由:临床质谱是时下热点
相关话题
1
LC-MSMS法同时分析血液中五种免疫抑制剂浓度
2
BioCore SEC-300色谱柱寿命测试
3
请问如何大致推测药物在质谱的响应
4
Waters Xevo G2-S Q-Tof无法进入Operate的模式,请问这是什么原因呢?
5
如何评价内标是否合适(多内标法)
+关注
私聊
hujiangtao
第1楼
2023/02/09
应助达人
可以参加今年的原创大赛
0
发表回复
近期热榜
2024“世界环境日”有奖征文活动启动!
巡检超百家 丹纳赫集团参与第四届客户关怀季
【第4届客户关怀月】SCIEX公司远程指导
第三届“信立方杯”微课大赛开始报名啦!
热门活动
甄选国优仪器,助推设备更新
采购咨询618活动:1000元奖励等你拿
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
孔雀石绿和隐色孔雀石绿的疑惑 求求大神们支援
求助
2024/06/09
瘦肉精沙丁胺醇出峰时间太早怎么办?
已应助
2022/07/19
请问方法确证稳定性可以用之前的标曲吗
悬赏帖
2024/01/21
安捷伦6470B和AB 3500选哪一个?
已应助
2022/08/19
求助各位大神tic图出现基线漂移和噪音
原创
2024/06/22
涂料中有害芳香胺含量的测定
分享
2024/06/22
岛津gcms的问题
原创
2024/06/22
GCMS气质联用仪质谱真空泄漏
求助
2024/06/21
质控样的测试结果如何评价?
求助
2024/06/18
记录扫描保存后可以废弃纸质版吗?
已应助
2024/06/18
做气相检测时用的色谱试剂,顶空试剂,农残试剂和GC级别的怎么区分使用?可以互换使用吗?对检测结果有什么影响?
求助
2024/06/18
ppm单位的计算
原创
2024/06/16
品牌合作伙伴
6月26日 马尔文帕纳科现场直播间
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...