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电转染影响因素5
lijing320323
2023/03/02
私聊
食品常规理化分析
5、 温度
一般情况下,电转的过程是在室温下进行,但在 电击前后可对细胞进行冰浴处理。电击前冰浴的时间对转染率影响不大,但低温环境能够防止DNA被外源性DNA酶降解,并限制在电击中因Joule作用而产生的不良反应,因此,实验一般选择电击前冰浴5min。电击后冰浴,会影响DNA摄入,因为电击后冰浴可增强细胞收缩,细胞膜上的 电穿孔封闭较慢,延长外源性DNA摄入时间,从而提高其摄入量。在室温环境下,虽然细胞膜上的孔 封闭速度快,但在随后2h,质粒还可通过电内化进入细胞,因此摄人量不一定比4℃环境下低。而且,室温下细胞在5 min内即闭孔,在4℃的环境下穿孔状态可保持4h,穿孔封闭缓慢降低了存活率,同时细胞在低温下更容易受到损伤。
因此,综合考虑摄人量和存活率,大部分文献倾向于电击后细胞仍在室温或37℃下保存。
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