仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
生命科学仪器综合讨论
>
帖子详情
抗体亲和力成熟原理及技术方法详解
Ins_bf0c01c3
2023/08/28
私聊
生命科学仪器综合讨论
抗体亲和力成熟
(antibodyaffinitymaturation)
是指机体正常存在的一种免疫功能状态。在体液免疫中,再次应答所产生抗体的平均亲和力高于初次免疫应答。这种现象称为抗体亲和力成熟。机体的这种功能状态是长期进化和对外界环境不断适应的结果,对机体防御和维持自身免疫监控有着十分重要的意义。
体内亲和力成熟
抗体亲和力成熟形成的原因,是抗体形成细胞本身的基因突变和抗原对
B
细胞克隆的选择性激活。机体在接受抗原刺激后,体细胞发生高频突变,突变产生的各种亲和力不同的
B
细胞克隆,经过滤泡树突细胞捕获,使得后代
B
细胞及其产生的抗体对抗原的平均亲和力得到了提升,从而实现了亲和力的体内成熟。
在机体体液免疫系统中,
B
淋巴细胞应对抗原刺激诱导,产生抗体。在反复暴露于抗原的过程中,产生高亲和力的抗体。这涉及两个相互关联的过程:首先在骨髓抗体轻重链的胚系基因片段经
V-(D)-J
随机重排产生超过
106
的组合,这是抗体特异性免疫反应的分子基础;其次,机体接受抗原刺激后,在二级淋巴器官的生发中心,抗体基因尤其是互补决定区(
complementaritydeterminingregion
,
CDR
)发生高频突变,突变导致抗体结合特性改变。经过滤泡树突状细胞提呈抗原,只有抗原亲和力最高的
B
细胞将选择生存进一步分化为浆细胞和记忆细胞。对于高频突变,近期研究表明:活化的胞嘧啶核苷脱氨酶(
activation-inducedcytidinedeaminase
,
AID
)将胞嘧啶脱氨基转化为尿嘧啶,突变后的尿嘧啶引发错配和碱基剪切并引发
DNA
修复,而不正确修复进一步加剧突变产生,导致抗体基因高频突变诱发高亲和力抗体产生。
体外抗体亲和力成熟
抗体制备技术的发展,经历了多克隆技术、单克隆技术和抗体库技术
3
个发展阶段。与单、多克隆技术相比,抗体库技术在基因水平上的操作非常灵活,可对基因序列进行分析、修饰和加工以改进抗体特性或赋予抗体新特性,突破了以往仅局限于抗抗原分子设计的限制。然而,抗体库来源的抗体与传统的单、多克隆抗体相比,实际应用非常少见,主要是因为库来源抗体与天然抗体相比,亲和力偏低,难以满足多种实际需求。特别是来自于未经免疫的天然抗体库中的抗体,抗体的亲和力通常在微摩尔水平,这仅与动物在初次免疫应答后获得的抗体亲和力水平相当。因此人们依据体内抗体亲和力成熟原理,模拟体内亲和力成熟过程、采取各种策略对抗体基因进行相应突变,进行体外亲和力成熟研究。
常用的抗体体外亲和力成熟技术
根据体内抗体亲和力成熟原理,在体外抗体亲和力成熟过程中,选择突变区域以及如何引入突变是一个关键问题,目前的突变策略主要分为三大类,随机突变、置换和定向突变。
①易错
PCR
易错
PCR
是目前最常用的抗体突变技术,可以在抗体基因的全长或部分区域随机引入突变。在聚合酶对目的
基因扩增
时,通过应用错配率高的聚合酶或调整反应条件等,以一定的频率向目的基因中随机引入突变,并通过多轮
PCR
反复进行随机诱变,累计突变效应,最终获得目的蛋白的随机突变体。
②链置换
链置换是保留某个特定抗体的重链或轻链,另一条链与一个随机化的互补链进行组合,从中筛选更高活性的突变株。通过固定抗体两条链中的一条链,对另一条链构建具有足够多样性的置换文库,随机组合有可能产生最佳链组合,经过噬菌体抗体库筛选可获得高亲和力的新抗体。链置换策略常采用轻链替换。
③定点突变
由于天然抗体在亲和力成熟过程中,体细胞高频突变发生区域并非均匀分布,而是主要集中在与抗原直接接触的
CDR
区。在抗体的亲和力体外成熟过程中,
CDR
区是最常选用的定点突变区域,这样既可以获得足够的序列多样性,又不会破坏蛋白质结构。对
CDR
进行定点突变时,可以对多个
CDR
进行平行突变或进行逐步优化。
④
DNA
改组
DNA
改组技术是对同源的抗体基因,采用脱氧核糖核酸酶Ⅰ将其切割成不超过
50bp
的片段,再随机组合后进行
PCR
扩增成完成的抗体基因的技术。它包含了抗体片段随机化切割、重组和筛选的过程,一定程度上模拟了天然抗体的亲和力成熟过程,并加快了体外定向进化速度。
Tips:
1
、在链置换中为什么通常替换的都是轻链?
答:因为抗体重链在抗结合活性和结构方面比较重要,所以链置换策略常采用轻链替换,以尽量避免链替换后抗体结合特异性发生变化。
2
、抗体库技术与单、多抗技术相比,有何优劣?
答:优势:抗体库技术筛选范围大、实验周期短、操作简单、不许进行免疫操作、可应用于大规模生产劣势:亲和力弱,不易激发人体的抗原
-
抗体反应。临床应用受限较大。
义翘神州会为大家提供抗体亲和力成熟服务,同时义翘神州优势:
①丰富的经验及多例成功案例
②专业的抗体数据库分析系统
③计算机建模结构模拟优化
④随机突变、定点突变技术
⑤快速、高通量哺乳动物细胞抗体表达与筛选技术平台
⑥
OCTET Affinity, Kinetics, off-rate, ranking
同时
抗体亲和力成熟服务
内容及流程详解可以参看抗体亲和力成熟
https://cn.sinobiological.com/services/antibody-affinity-maturation-service
相关话题
1
原核蛋白表达常见5大技术性问题解析:
2
义翘神州核酸高效清除解决方案及FAQ
3
Fc融合蛋白结构、功能、与优势
4
抗体标记的方法及注意事项有哪些?
5
单域抗体是什么?单域抗体优缺点介绍
近期热榜
2024“世界环境日”有奖征文活动启动!
安捷伦公司端午送福利
iCEM2024重磅开启6月25-28日
第三届“信立方杯”微课大赛开始报名啦!
热门活动
采购咨询618活动:1000元奖励等你拿
《气相色谱实战宝典》图书免费送!!!
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
离子交换层析原理和步骤
资料
2023/09/07
噬菌体展示技术和杂交瘤技术有何优缺点?
资料
2023/08/22
优利特URIT-12型便携式血红蛋白分析仪电路原理解析
第十六届原创
2023/08/01
跨膜蛋白是什么?跨膜蛋白开发常见问题解答(FAQs)
资料
2023/09/08
砝码材质,质量,形状,等级及图片分析,希望能帮助到您
求助
2023/12/30
【新手求助】第三方实验室的用电量
已应助
2023/12/29
机械天平主要部件
讨论
2023/12/05
天平出现异常以及解决的办法
分享
2023/12/05
精密仪器设备是否需要对人员进行操作考核,如何考核呢,一个人可以授权两台不同的操作仪器吗?
讨论
2024/06/10
【第四季客户关怀月】---- 安捷伦公司端午送福利
原创
2024/06/12
岛津gc2014c故障
已应助
2024/06/11
cnas证书续签问题
求助
2024/06/09
品牌合作伙伴
智启未来,磐诺智慧工厂云端开放日,揭秘国产力量
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...