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抗体纯化和蛋白纯化有什么区别?从定义及原理上剖析:
Ins_bf0c01c3
2023/09/21
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生命科学仪器综合讨论
什么是抗体纯化?抗体纯化原理:
抗体纯化是指从抗血清(
pAb
)、腹水或杂交瘤细胞系(
mAb
)细胞培养上清液中提取抗体的过程。纯化后的抗体适用于多种应用。该过程可以在提供抗体纯化服务的实验室中进行,如果有必需的设备和工具,也可以自行纯化。如研究人员担心原始研究的完整性受到破坏,可在实验室中进行纯化,确保研究快速进行。
抗体的主要来源之一是在动物体内生成的抗血清。在这种情况下,反复向动物体内注射抗原,直到抗体开发完成为止,其血液用于制备抗血清,经纯化后可获得多克隆抗体。抗体的另一个来源是克隆细胞,其作为相同细胞群的一部分生成抗体;这种方法用于大规模生产单克隆抗体。查看更多有关
“单克隆抗体纯化”的信息。
什么是蛋白纯化?
重组蛋白的纯化是生物学研究中的重要技术。为了研究蛋白的特定功能和结构,研究人员必须将重组蛋白从生物体中分离并纯化。蛋白纯化方法主要利用不同重组蛋白之间的相似性和差异性。可以根据蛋白之间的相似性去除非蛋白物质,然后根据蛋白之间的差异分离纯化目标重组蛋白。
蛋白标签是一种可以提高重组蛋白的溶解度、简化蛋白纯化的简单有效的工具,并通过简单的方法跟踪蛋白表达和纯化过程。此外,蛋白标签是追踪活细胞中蛋白和进程的一种有效工具,可以通过显微镜直接跟踪或者通过
Western blot
、免疫沉淀或免疫染色间接进行跟踪。
蛋白纯化原理:
不同的重组蛋白具有不同的氨基酸序列和空间结构,导致其物理、化学和生物学特性存在差异。我们也可以根据目标蛋白与其他蛋白和裂解液的性质差异设计合理的蛋白纯化方案。
大多数的纯化方案需要不止一步才能达到理想的纯度水平。该过程中的每一步都会造成一定的产品损失,假设每一步的获得率为
80%
。因此,建议尽可能减少纯化步骤。起始原料的选择是纯化过程设计的关键。
在背景信息、检测方法和样品规格都已到位的情况下,可以考虑采用三阶段纯化策略。纯化分为捕获、中度纯化和精细纯化三个阶段,每个阶段都有特定的目标。捕获阶段的目标是分离、浓缩和稳定目标产物。
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