仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
生命科学仪器综合讨论
>
帖子详情
流式细胞分析方案详解:从步骤到流式免疫检测的全面指南
Ins_bf0c01c3
2023/12/08
私聊
生命科学仪器综合讨论
流式细胞分析是一种在生物学和医学领域广泛应用的实验技术,它可以实现对细胞群体的快速、准确分析和分类。本文将详细介绍流式细胞分析的步骤和流式免疫检测的应用,帮助读者全面了解这一技术的原理、方法和应用。
流式细胞分析方案主要分为
4
个步骤:
①样品制备:应通过机械分离方法或化学解离技术制备单细胞悬液,如采用酶溶液或钙螯合试剂。
②封闭:通常采用抗
Fc
抗体稀释液悬浮细胞,防止一抗非特异性结合。
③抗体孵育:流式细胞分析的孵育步骤涉及多种组分,包括一抗、二抗、链霉亲和素和荧光染料。
④流式细胞仪检测:将处理后的细胞通过流式细胞仪进行检测和分析,获取细胞的各项指标数据。
适当的对照
除了目标细胞之外,每次进行流式细胞实验还应包含以下对照:
至少一份未染色样品,与试样同时进行每一步的缓冲液孵育,以优化实验的流速和电压。
一份适当的阴性对照样品,与试样基本相同,但用在一抗的宿主种属中生产的同型对照替代试样中的一抗。该对照用于非特异性结合二抗。
如有需要也可准备一份已知表达所有目标抗原的细胞组成的阳性对照,并与试样共同孵育,但仅用单色检测。
流式免疫检测方法与应用
同其他免疫检测应用一样,流式细胞分析也可通过多种方法利用抗体探测特定的细胞基元。两大常用方法为:直接检测法和间接检测法。
直接检测法
直接检测法采用一步染色工艺,仅需一抗即能特异性结合目标抗原,无需额外步骤,可直接与支持成像或其他结合状态检测的分子结合。在探测细胞表面抗原时,应避免固定细胞,因为固定可能导致抗体探针无法与目标抗原充分接触。因此,保持细胞活力对于数据采集至关重要。若需查找适用于直接检测法的抗体,推荐使用
Antibody Explorer
抗体搜索工具,将搜索范围限定为“仅限一抗”,并将应用选择为“流式细胞分析”。这样,您将能够快速找到适合您实验需求的抗体。
间接检测法
间接检测法首先使用纯化抗体与目标抗原进行结合,然后使用荧光染料标记的二抗(能够特异性靶向一抗的宿主同型)与一抗进行特异性结合,形成一抗
-
荧光二抗复合物。通过将纯化的一抗与各种波长(或颜色)的荧光染料标记的二抗(特异性针对产生一抗的宿主同型)进行搭配,可以增强抗体库的模块化程度。这种方法能够提高实验的灵敏度和特异性,同时减少背景干扰和误差。
义翘神州提供
流式细胞检测技术服务
,其优势:
①具有
20,000
次以上流式抗体筛选鉴定经验及多年流式诊断抗体研发经验,在实验方案设计、样品制备、数据分析等方面确保科学性、准确性和可靠性
;
②拥有
1,000
余株自产精品流式抗体,覆盖细胞膜、胞内、核内及分泌抗原;
③自产
Annexin V/7-AAD
凋亡检测试剂盒,并储备多种流式检测常用试剂,大大节约购买试剂的等待时间和实际费用;
④可以提供近
200
种细胞系选择,省去细胞样本寄送过程中的风险,并可以免费提供健康人外周血细胞对照品。
详情可以关注
https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service
相关话题
1
ELISA类型及其原理:常见问题解答
2
什么是蛋白标签?蛋白标签在重组蛋白生产中有什么作用?
3
什么是抗体标记?高质量的标记抗体有哪些?
4
国内做重组蛋白好的公司推荐:义翘神州
5
低温设备中液氮管道真空漏气
近期热榜
2024“世界环境日”有奖征文活动启动!
安捷伦公司端午送福利
iCEM2024重磅开启6月25-28日
第三届“信立方杯”微课大赛开始报名啦!
热门活动
采购咨询618活动:1000元奖励等你拿
《气相色谱实战宝典》图书免费送!!!
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
液氮罐内压力异常的原因和解决方案
原创
2023/12/12
无细胞表达系统FAQ详解
资料
2023/11/24
膜蛋白提取原理及方法
资料
2024/01/19
包涵体蛋白复体常见十大问题解析
资料
2024/01/15
有关XRD峰位偏移问题
原创
2024/06/14
有关XRD文件处理
求助
2024/06/13
有关XRD图谱
求助
2024/06/12
单晶解析问题
求助
2024/06/10
精密仪器设备是否需要对人员进行操作考核,如何考核呢,一个人可以授权两台不同的操作仪器吗?
讨论
2024/06/10
【第四季客户关怀月】---- 安捷伦公司端午送福利
原创
2024/06/12
岛津gc2014c故障
已应助
2024/06/11
cnas证书续签问题
求助
2024/06/09
品牌合作伙伴
智启未来,磐诺智慧工厂云端开放日,揭秘国产力量
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...