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hrp标记抗体是什么意思?标记抗体有哪些方法?
Ins_bf0c01c3
2024/01/10
私聊
生命科学仪器综合讨论
辣根过氧化酶(
HRP
)是最常见的抗体酶标记类型。
HRP
上仅有
6
个赖氨酸,而且它们的修饰并没有较多的影响酶活性。常见的荧光染料有
FITC
、
PE
、
APC
和
PerCP
等,均可用于标记抗体。
HRP
辣根过氧化物酶标记二抗通常用于如免疫印迹、酶联免疫吸附试验以及免疫组织化学等应用。无论在化学发光法中、在比色法中还是在荧光法中,
HRP
标记二抗需要结合高信噪比的底物。
除了为客户提供抗体开发,义翘神州还可以提供抗体标记服务,可提供的标记物包括
HRP
、生物素、荧光基团等。
常见的抗体标记方法
和所有蛋白质一样,抗体也是由氨基酸组成的。理论上,通过大多数氨基酸可以实现生物偶联。以下内容介绍了几种基于赖氨酸残基的抗体偶联和标记技术。
①
NHS
(琥珀酰亚胺)酯法
应用广泛的荧光染料(如罗丹明衍生物)是采用这种方法对抗体进行偶联。通常在磷酸盐缓冲液中进行,随后与未标记的染料在柱上进行分离。该方法的主要缺点是,由于酯类对水分敏感,酯类的稳定性差。因此,反应结束后,标记抗体应立即使用。
吉妥珠单抗(
Gemtuzumab ozogamicin, Mylotarg®
)是全球范围内首个获批上市的抗体偶联药物(
ADC
)。半合成的卡奇霉素衍生物具有
NHS
酯,以便将卡奇霉素与人源化
IgG4
的赖氨酸残基偶联。然而,由于患者的临床获益不足,
Mylotarg®
已于
2010
年退市。
②
异硫氰酸盐法
这种方法主要用于异硫氰酸荧光素(
FITC
)染料的偶联,广泛用于荧光标记蛋白和抗体的制备。异硫氰酸盐比
NHS
更稳定,但也更难制备,而且利用该方法,标记的反应效率可能会降低。与
NHS
法一样,应在反应结束后通过层析法去除多余染料。
③
碳二亚胺法
碳二亚胺衍生化合物将蛋白质上的羧基转换为反应中间体,可与赖氨酸发生反应。碳二亚胺的高反应性意味着它们可用于使用相对惰性的材料(如磁性或金颗粒)标记抗体。最常用的碳二亚胺为
EDC
。
NHS
有时可被添加至反应中,以辅助产生相对稳定的中间体。
该方法操作简单,但与
NHS
一样,
EDS
具有吸水性,因此,标记后抗体需立即使用。
④
高碘酸盐法
这种方法可用于制备特异性的
HRP
标记抗体。高碘酸盐通过产生与赖氨酸残基相互作用的醛分子来激活
HRP
。
HRP
本身只有少量的赖氨酸残基,因此酶聚合的影响不大。
HRP
和抗体之间的键是可逆的,可通过添加氰基硼氢化钠使其保持稳定。
详情可关注义翘神州
抗体标记
:
https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation
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