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GB 31658.20 酰胺醇类出现无法线性拟合的问题分析与解决办法

  • 冰箱冻梨
    2024/04/26
    • 私聊

液质联用（LCMS）

  • 实验员做方法时发现，混标稀释配制而成的系列标准溶液上机后，氟苯尼考不成线性
    原以为是响应值的问题，没太在意，让人调节一下流动相中甲酸铵浓度试一下，结果仍然不成线性，如下图：



    于是我去机器工作站看情况，发现次响应值其实并不高，甚至挺低的（因为摸索过程中过分改变了甲酸铵的浓度），那么不成线性的原因是什么呢？
    分析标准曲线涉及的各个数据时，发现如果不选内标法，氟苯尼考本身线性良好，同时发现，氟苯尼考-D3浓度升高，与之前拟合的氟苯尼考呈相反的趋势



    所以可以推测，是氟苯尼考-D3收到了干扰，导致了这个异常结果！
    色谱图上看，氟苯尼考胺和氯霉素都分开了，保留时间对不上，不会是二者或二者的氘代内标影响，氟苯尼考本身线性良好、氯霉素线性也良好说明更不是配制溶液等操作问题，那么就剩下一个可能。。

    氟苯尼考影响了氟苯尼考-D3。。（皇后杀了皇后？）

    氟苯尼考化学式C12H14Cl2FNO4S，那有可能是因为化合物含有Cl元素且同位素内标选择不合理导致的，即外标物同位素与内标物质量数发生重叠。
    然后我查到了下图



    氟苯尼考[M-H]-离子的基峰为356.0，由于天然同位素的存在，因此氟苯尼考出现了358.0、359.0、360.0、361.0的离子峰
    好死不死，标准中规定的内标离子对是359.2＞339.0
    配制只有内标的溶液上机进样测定发现，峰面积是稳定的，当配制同浓度的氟苯尼考和氟苯尼考-D3，氟苯尼考-D3峰面积增大约17%

    到此，已经可以确定，随着目标物浓度的不断提高，内标的响应也会随之增大，内标法无法拟合线性也就可以解释了。

    【解决方案1-换更多氘的同位素内标】
    答：失败，市售好买的只有氟苯尼考-D3

    【解决方案2-换不受影响的内标离子通道】
    答：成功！经测试，将氟苯尼考-D3的MRM方法变更为361.0＞341.0，线性有了质的提升，虽然还差一点，但是只需要再调节一些条件，即可满足。

    没有选择362.1，是因为丰度确实有点太低了，担心影响响应值，但是应该也可以跑的出来，线性应该更好的多，有空时候再试试。

    再就是对氟苯尼考和氟苯尼考-D3做子离子扫描，找一个新的不受氟苯尼考影响的子离子。



    【解决方案3-在方案2的基础上，适当增大标准曲线溶液中和测试样品中的内标浓度】
    答：未进行测试，理论上就是进一步稀释氟苯尼考361.0同位素的影响，线性肯定会更好的。有空时候再试试。
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  • 该帖子已被版主-hujiangtao加5积分，加2经验;加分理由:鼓励发帖
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  • hujiangtao

    第1楼2024/04/26

    应助达人

    听过岛津一位工程师讲的，就是氟苯尼考内标法不成线性的问题，就是像楼主的说的

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  • Insm_fe8f17c4

    第2楼2024/04/28



    请问这张图是在哪里查到的？

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  • 冰箱冻梨

    第3楼2024/04/28

    我找找 有点忘记了。。
    或者你用单标自己做一下母离子扫描也能得到这样的图。。

    Insm_fe8f17c4(Insm_fe8f17c4) 发表:

    请问这张图是在哪里查到的？

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  • liushaoliche

    第5楼2024/05/01

    进来学习一下！

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  • Insm_a857577

    第9楼2024/05/03

    进来学习一下看看大有收获

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  • 物价真高

    第10楼2024/05/06

    应助达人

    谢谢分享学习了

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  • Ins_9606c2bc

    第11楼2024/05/20

    楼主你好，关于这个问题我也发现了，我直接增大了氟苯尼考的内标加入量，这样就能不受外标的干扰。但是关于31658.20有另一个让我十分困扰的问题，就是氟苯尼考胺的绝对回收率太低了，内标的回收率只有10%左右，请问你们做的时候是怎么解决的呢？

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  • 冰箱冻梨

    第12楼2024/05/21

    氟苯尼考胺和氟苯尼考胺内标都只有10%吗？
    你们氟苯尼考胺出峰时间是多少呢？

    Ins_9606c2bc(Ins_9606c2bc) 发表:楼主你好，关于这个问题我也发现了，我直接增大了氟苯尼考的内标加入量，这样就能不受外标的干扰。但是关于31658.20有另一个让我十分困扰的问题，就是氟苯尼考胺的绝对回收率太低了，内标的回收率只有10%左右，请问你们做的时候是怎么解决的呢？

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  • Ins_9606c2bc

    第13楼2024/05/27

    用的5mmol/L乙酸铵和乙腈作为流动相，出峰时间在3-5分钟这个区间，有时候会调一下

    冰箱冻梨(Insp_5ed917dd) 发表:氟苯尼考胺和氟苯尼考胺内标都只有10%吗？
    你们氟苯尼考胺出峰时间是多少呢？

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