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液相色谱标准曲线怎么做
Insp_3dd89f61
2024/10/19
私聊
综合仪器讨论
标准曲线绘制步骤:
?准备标准样品?:首先,使用欲测组分的标准样品,配制成不同浓度的标准系列。这些标准样品应在与待测组分相同的色谱条件下进行配制。
?绘制标准曲线?:在相同的色谱条件下,等体积准确进样,测量各峰的峰面积或峰高。用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准曲线。理想的标准曲线应是通过原点的直线,如果标准曲线不通过原点,则说明存在系统误差。
?测定空白对照?:在仪器推荐的浓度范围内,制备含待测元素的对照品溶液至少3份,浓度依次递增,并分别加入各品种项下制备供试品溶液的相应试剂。同时以相应试剂制备空白对照溶液。将仪器按规定启动后,依次测定空白对照溶液和各浓度对照品溶液的吸光度,记录读数。
?线性关系考察?:
液相色谱
的线性关系应满足R2 > 0.999,以确保浓度与峰面积的相关性。如果线性关系不满足,则说明仪器测量有一个浓度范围,超过这个范围,线性关系就不存在了。
液相色谱
标准曲线的注意事项
?系统误差?:如果标准曲线不通过原点,说明存在系统误差,需要检查仪器或方法是否存在问题。
?空白对照?:在构建标准曲线时,即使空白或0管有响应值,也应认为该响应值就是0浓度,即在计算时应扣除这个空白的响应值。
?线性检验?:标准曲线的拟合应通过线性检验和失拟检验,确保拟合的曲线符合统计学上的参数最少原则。如果线性检验合格(P<0.05)且失拟检验合格(p>0.05),则可以采用线性模型。
?仪器条件?:上机条件(如柱温、流速、流动相等)的准确与稳定是确保线性关系的重要因素。标准曲线是独立测定的,不与样品的提取条件有关,但它是衡量样品浓度的标准。
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