我认为载距的大小直接影响最终结果的，理由是载距主要是由标准曲线的工作介质决定的，而根据标准曲线法测定样品的浓度的基本一点就是标准工作溶液应当与样品溶液尽可能地相似。因此，如果载距过大，对样品的测定值的影响也就越大。另外有个说法，样品空白吸收值应当是样品的吸收值的10%，这样的测定结果才有效，不知道各位对此说法有什么看法/

看看下面的文章我觉得有帮助的

校准曲线制作和应用中的几个误区
徐继荣1,戴友恒2
(宁波大学建筑工程与环境学院,浙江宁波315211;2.宁波大学再求业中心,浙江宁波315040)
摘要:从统计学、分析方法检出限的定义和仪器分析的实际出发,指出在日常化学、仪器分
析工作中,用最小二乘法求回归直线方程、制作校准曲线时,常常出现将零浓度作为样本代
入方程、扣除空白、以空白溶液作参比等3错误.给出了合理制作和使用校准曲线的方法.
关键词:校准曲线;　制作;　方法
中图分类号:O212;O651　　　　文献标识码:B
在化学分析和仪器分析中,经常需要通过制作校准曲线(有时亦称标准曲线或工作曲线),并由
此来计算和分析样品中待测物质的含量或浓度.由于计算机的普及和应用,以前手工制作校准曲线
的方法已被用最小二乘法计算回归方程所取代.许多分析仪器还自备电脑,这样不仅降低了劳动强
度,而且使数据处理方法更为科学,得到的分析结果也更加准确.但是如何正确使用实验数据求得
合理的回归方程是分析工作中容易被忽视的问题.诸如零浓度是否应当参加回归?参加回归的因
变量是否应当扣除空白?用零浓度作参比是否恰当等等,都是分析工作中经常要碰到的问题,而这
些问题又不属于统计学研究的范畴,因此,很少有文献论及.一些分析、监测规范中虽然有示例可以
参照,但这些例子往往不尽合理.甚至,有作者撰文认为可以用试剂空白作参比[1].为此,笔者从统
计学原理和分析方法检出限定义出发提出以下几个观点和在实际工作中如何求算回归方程、制作
校准曲线的方法.
1　零浓度不应参加回归
在实际的分析工作中,为了制作校准曲线首先必须配制一个标准系列.通常标准系列中都含有
一个零浓度,这个零浓度及其响应值是否应参加回归呢?我们知道就最小二乘法而言,只要数据不
是离群值,并不排斥其参加回归,而且,参加回归计算的样本越多,得到的校准曲线越可靠,计算出
的测定数据越准确.这一点可以从抽样的误差理论得出.
在回归方程y=b+ax中因变量y是随机变量,y的方差为[2]:
　　　　　　σ2=1n[∑(y-a-bx)2].
　　根据样本值(xi,yi)得到的a,b也是随机变量.例如,当实验误差较大时,我们做几批实验,分
别绘制出几条工作曲线,它们的斜率和截距是各不相同的,抽样误差会影响a,b的值.在统计学上
a,b的变动性用a,b的方差来表示,它们分别是[3]:
　　　　　　σ2a=σ2[1n+x2
—
∑(x- x)2]=σ2∑x2in∑(x- x)2, 第3期徐继荣等:校准曲线制作和应用的几个误区

　　　　　　σ2b=σ2∑(xi- x)2=nσ2n(xi- x)2.
　　上式表明,回归系数b的变动性,不仅与误差的方差有关,而且还取决于实验数据中自变量xi
取值范围的大小,xi的取值范围较宽,则b的波动范围就较小,即估计比较精确,反之精确度就差.
而常数项目a的方差,不仅与σ2和xi的波动大小有关,而且还同实验数据的个数有关.数据越多,
且xi值范围越大,误差将越小,估计值a也越精确.
从以上论述看零浓度不参加回归似乎将损害回归方程的准确性.那么,是否意味着应该让零浓
度参加回归呢?不是.零浓度不应当参加回归的根本原因是零浓度不符合参加回归的条件.因为,
任何一个分析方法都有一个最低检出限,即使是最灵敏的分析方法其最低检出限也不可能为零.回
归曲线是有一定使用范围的,原则上不得超过标准系列的最高浓度和最低浓度.让零浓度参加回归
不仅不合理地扩大了回归曲线的使用范围,还会误导分析工作者无视检出限的意义,报告出低于检
出限的不合理数据.
零浓度不参加回归意味着参加回归分析的数据将减少一组,自变量xi,因变量yi的取值范围
也小了,从而导致回归方程的准确性降低.那么,除零浓度以外制作一条校准曲线需要几个浓度呢?
一般的分析要求不少于5个浓度,即自变量xi,因变量yi数据不少于5组.有些检测规范和指南中
要求不少于6个浓度.当然,回归的相关系数R还必须符合相关性要求.
2　以空白做参比和扣除空白的缺陷
以空白做参比和扣除空白进行回归分析制作校准曲线在实际的分析工作中也是十分常见的.
例如,在光度分析中,需要作吸光度-浓度校准曲线,通常都是以空白溶液作参比,将分光光度计读
图1　回归值^y与预报值y波动大小示意图
数调零,然后依次将标准系列溶液推入光路,以读取各
吸光值.《海洋监测规范》[3]和其它的监测规范和分析
化学手册中则多数推荐以纯水或纯溶剂作参比,而用
以回归的因变量yi要扣除空白值A0即:yi′=yi-A0
笔者认为这两种做法均值得商榷.
首先,如果空白值低于检出限,从上面的分析可
知,空白溶液因为其测定值不合理(低于分析方法的最
低检出限)是不能参与回归分析的.再者,即使空白值
高于检出限,以空白溶液作参比也至少有以下几个缺
陷:(1)空白值的准确度较差,将影响其它响应值的准
确性.我们知道根据自变量x,预报因变量y值时,其精度与x的大小有关,靠近平均数的x精度
高,离平均数愈远,精度就愈差.这一点从下列公式和图1可以看出.统计学上求得对于指定x=
x0,预报y的标准差s预,和残余标准差s余有如下关系[5]:
　　　　　　s预=s余1+1n+(x0- x)2∑(x- x)2.(4)
(2)只要空白溶液的显色强度有波动,空白值一个实验点就能使整条校准曲线发生上下平移.(3)当
每个实验点只作一次测量时(单样),很难发现空白值有无波动.(4)如果作双份或多份空白,若吸光
度有差别,也无法确定究竟用哪一份空白作参比更好,对制作校准曲线也无帮助.
以扣除空白的因变量制作校准曲线也有一些缺陷:(1)如果只作单样,同上所述空白的准确度 差,不合理的误差由于扣除空白而传递给了每一个测量点的数值,进而传递给整条校准曲线.(2)如
果作双样或多样空白,取平均值代表空白值虽说可以弥补准确度不高的缺陷,但又会增加工作量.
(3)扣除空白的原意是要消除固定偏倚,但按照《海洋监测规范》求得的仍然是y=a+bx形式的
回归方程,固定偏倚并未消除,这显然是自相矛盾.笔者认为通过回归分析得到的方程式y=a+
bx中的a更接近于空白溶液的真值.要扣除空白值,也应扣除a的值才是.
我们不妨看一实例[4].
表1　标准系列测定记录
浓度(x)0.000.0020.0030.0050.0080.012
吸光度(y)0.060.120.140.270.400.52
校正吸光度(z)0.000.060.080.210.340.46
　　零浓度均不参加回归,得到下列两个回归方程(方程a未扣除空白、方程b扣除了空白进行回
归计算):
　　　　　　y=0.04+41.67x.(a)
　　　　　　z=-0.02+41.67x.(b)
　　从表面上我们很难看出哪一个公式是扣除了空白值的,哪一个公式更加合理.从式(a)可知该
实验的固定偏倚大约是0.04.而实验测得的空白值是0.06,这其中不仅包括了固定偏倚也包括了
随机误差.从各实验点数据中扣除0.06,后果是不仅消除了固定偏倚也将零浓度的随机误差传递
给了各实验点数据,因此,回归得到的方程(b)z=-0.02+41.67x,仍然不完全符合郎伯—比尔
定律.此时方程(b)中的常数项-0.02有何物理意义,很难说清楚.因而笔者认为,用扣除空白求回
归方程的做法不合理.
从上述分析可知,让零浓度参加回归、以空白溶液作参比和扣除空白求回归方程、制作校准曲
线的做法都是不合理的.正确的做法是,对于标准系列与样品具有相同空白的实验来说比较简单,
直接用除零浓度以外的测定数据直接求回归方程、制作校准曲线.对于待测的未知浓度的样品,只
要将测得的样品的响应值代入回归方程即可求得其浓度.
对于样品与标准系列具有不同空白值的分析实验,计算起来就要复杂一些.这时,可同样用舍
弃空白值的实验数据求得回归方程,以方程的常数项a作为空白,然后将直线从通过矩心平移到
通过原点,这样得到的方程完全符合郎伯—比尔定律即y=bx,b=∑xy/∑y2.求算未知样品
的浓度时,首先要测出未知样品响应值yi,再测出样品空白值A0,以yi-A0得到yi′,以yi′代入
回归方程即可求得未知样品的浓度xi.应当指出,如果样品的空白值低于方法的检出限,从理论上
说这样扣除空白值也是错误的.严格地说这时的空白值应当通过标准添加法求出.
从以上分析来看,制作标准系列时加入一个零浓度似乎意义不大.事实也如此.笔者认为还是
加上为好.因为,制作零浓度比较方便,还可以用来估算检出限和判断第一点浓度(浓度最低点)是
否适当.同时零浓度的实验数据可用来制作质量控制图,这也是保证分析数据准确性不可或缺的.
应当指出:本文所提到的让零浓度参加回归、以空白溶液作参比和扣除求回归方程的方法虽说
从理论上讲不甚恰当,但求得的结果与真值相差不大,通常都在分析结果的置信区间之内.因此,这
些误区容易被人们忽视.

针对这点,个人建议还是要扣除试剂空白,而不用0的浓度点.

这个问题确挺有意思，目前国内外厂家设计的仪器中，有关标准曲线的绘制，确实存在有二种方法（顺便说一下，讲国标方法中标准曲线的绘制方法中是没有要扣除标准空白概念的，这样也许带有些主观的看法，因为标准空白的扣除----也许是无须多讲的常规操作，就象车工干完一个零件后再要倒个角以去除毛刺一样），问题是如何处理这个标空好？
厂家常用的方法是：
1，X轴平移法-----即标空不参与回归，而把标空的吸光度作为Y轴的0点。也就是上面讲的每点标准读数都须再减去标空的读数，并以此值代入公式。
2，标空参与回归-----这样各点标准读数无须再另扣标空的吸光度，直接代入计算即可。
哪种方法更好些？但我看只要考虑了标空（别不理它），这二种方法的误差都不会很大。tz175介绍的一篇文章讲了很多，但我看作者的结论还不很明确，特别是对标空低于检出限的情况下，他提出的方法是用标准加入法测标空，哈，我真不知该怎么去做为好。或许对于几乎测不出的标空，干脆把它作为0处理得了，对你测定结果不会有什么影响的，这是个实用的方法，又何必非得测它一下呢？

我是初学者，感觉仍然 能学到很多东西

我认为浓度为0的标液做其它浓度标液的标样空白

我认为浓度为0的标液做其它浓度标液的标样空白

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