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  • happyjyl

    第21楼2008/08/25

    再请教:二维图谱的两个坐标是保留时间和峰面积,那三维图谱的第三个坐标是什么呢?谢谢。

    sunlitj 发表:6. 在一般的色谱分析中都要分析色谱峰的纯度吗?
    这个不是一般的色谱分析,强制降解试验,就是找一个合适的条件使样品分解,然后通过DAD检测器,做三维图谱,看每一个峰在相应的波长处是单峰还是几个峰,这个应该是HPLC分析方法验证的一项内容。我们在做方法验证,有这样的分析,但是我也不是特别清楚。

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  • flyaway

    第22楼2008/08/25

    给你张图三维图看看先

    happyjyl 发表:再请教:二维图谱的两个坐标是保留时间和峰面积,那三维图谱的第三个坐标是什么呢?谢谢。

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  • flyaway

    第23楼2008/08/25

    三维数据的第三个座标是wavelength
    此外,第二个座标并不是面积,而是响应值。对于FLU检测器,3D数据的纵座标是荧光的响应吸收值,而对于绝大多数的HPLC的仪器,三维数据的纵座标是紫外检测器的吸收值,以AU或者V、mV表示。

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  • flyaway

    第24楼2008/08/25

    6. 在一般的色谱分析中都要分析色谱峰的纯度吗?
    在中华人民共和国药典二部附录XIX,药品质量标准分析方法验证指导原则中的“三 专属性”中提到“必要时可采用光电二极管阵列检测和质谱检测,进行峰纯度检查”。(附录173页。)
    在USP25的2257页中也提到可以用PDA与MS进行峰的纯度测试。

    实际工作中,我们在建立一个新的HPLC分析方法时,尤其是有关物质检查时,会引用PDA的数据作为旁证。

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  • 欢迎光临iblog

    第25楼2008/08/25

    借用一下这个三维图,谢谢!
    [/quote]

    在上面三维谱图中,可以进行二维谱图提取
    1、如果固定一个时间点(4.00min),提取的谱图就是随着波长变化,吸收值的变化----光谱图。
    它的意义就是保留时间为4.00min的物质的光谱图。
    纯度角的概念或者说查看峰的纯度就是基于DAD检测器可以进行连续波长扫描,可以得到不同
    保留时间下对应物质的光谱图。一个峰有一定的峰宽(或者说时间跨度),以峰顶处的光谱为
    标准,软件自动比较其与色谱峰上每个采样点的光谱之间的差异。如果峰顶与色谱峰上其它点的
    光谱图没有明显差异,就认为这个峰纯。


    2、固定波长(256nm),提取的就是随着时间变化吸收值的变化---色谱图。
    也就是我们平时最熟悉的液相色谱图。

    happyjyl 发表:三维图谱的第三个坐标是什么呢?谢谢。

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  • flyaway

    第26楼2008/08/25

    峰纯度结果
    纯度角:光谱一致性的一种衡量方法,即将积分峰上每个数据点的光谱与峰顶点光谱进行对照,计算出所有的“光谱对照角”,然后求其加权平均值。

    “纯度角”的范围是从 0 到 90 度。值小(特别在小于阈值时)表明光谱均匀。值大表明不均匀程度较大。

    纯度阈值:“纯度噪音角”与“溶剂角”之和。此值是可由共流出物、噪音、光测误差(高样品浓度)和/或溶剂单独引起的最大“纯度角”,而不是光谱形状的实际差别。

    “纯度阈值”的范围是从 0 到 90 度。值很大表示测量的敏感度较低。“纯度噪音角”是整个积分峰内“噪音角”的加权平均值。

    噪音角:“噪音角” 的大小与化合物的浓度成反比。通常,化合物的浓度越低,“噪音角”越大。“噪音角”越高,“纯度”测试对共流出分析物的存在的敏感度越低。

    注:共流出物、噪音、溶剂成分或这些因素的组合都可导致光谱不均匀。

    解释结果

    在“结果”窗口中 ,将“纯度角”与“纯度阈值”进行对照,可以解释“峰纯度”结果。在解释“峰纯度”结果时,请注意以下注意事项:

    “纯度角”和“纯度阈值”的值大小不能用于证明化学纯度。

    要检测共流出物,杂质必需有 UV/Vis 吸光度、浓度大于检测极限,而且其光谱与主要峰组份不同。

    如果噪音间隔包含的峰有 UV/Vis 吸光度,则会报告“阈值角度”值太大。结果,包含共流出物组份的一些峰将被报告为纯净的。

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  • flyaway

    第27楼2008/08/25

    1. purity angle译为纯度角是可行的。不应该有负值。具体情见26楼的贴
    2. threshold此处译为阈值,或者纯度阈值。的确purity angle超过它就不合格。计算方式与注意事项26楼我已经说明了。

    4. 表2中的homogeneous(暂且译为“色谱峰均一”),我们一般翻译为光谱一致性。
    如果纯度角 < 噪音角,则在测量的噪音内光谱是均匀的。
    5. 为什么要分析色谱峰的纯度呢?看峰形、计算分离度不行吗?
    请见24楼的贴。
    6. 在一般的色谱分析中都要分析色谱峰的纯度吗?
    见24楼的贴。

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  • zying9

    第28楼2008/08/25

    第三个坐标是波长

    happyjyl 发表:再请教:二维图谱的两个坐标是保留时间和峰面积,那三维图谱的第三个坐标是什么呢?谢谢。

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  • aiqiuqiu

    第29楼2008/08/25

    引用:
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    原文由 yangz 发表:这是色谱分析中用到的一个参数,指的是所分离的色谱峰的纯度即此峰是单一成分还是混有其他成分,因为色谱就是一个分离净化过程,峰不纯则没有达到目的。计算纯度必须用到DAD检测器普通的VWD是不成的,其计算是基于DAD检测器所接收的光谱信号,具体的这里不好介绍要看一看DAD的说明了
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    分享学习!万分感谢!

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  • happyjyl

    第30楼2008/08/26

    再次感谢各位的帮助,尤其是sunlitj、flyaway和baihezll的专业解释!为表感谢,每人转入20分,请查收。我在资料后面的结论里也看到了这样一句话:Purity angle of Verapmail HCl is less than the purity threshold in the entire degradation study chromatogram, which indicates that the peak is spectrally homogeneous.所以表格里的homogeneous我就参照flyaway的建议翻译成“色谱峰具有光谱一致性”。

    我要回去好好消化一下,有问题再拿上来问。

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