您为什么不用梯度来做，因为从您的图谱上看，极性相差挺大的，如果您把乙腈的比例改小的话，主峰的时间相应也会拖后，所以还是用梯度比较好

做梯度的好处是什么呢？如何做才是最理想的？

你的检测波长是多少？样品还有你前面需要的那个杂质的结构式能画一下么？如果不保密的话。不方便贴在这里的话给我邮件，我的邮箱已发给你。

杂质的结构还不太清楚，经扫描此样品在258nm 304nm 502nm分别有吸收，这个三个波长我都试过，结果还是不理想，图上检测波长为305nm。

您现在用的是95ACN:5water的水对吧，可以给您列举一个梯度，不行的话，您可以尝试改变初始水的比例：
A： ACN B： water
Time(min) B% Flow(ml/min)
0.01 30 1.0
15 0 1.0
20 0 1.0
21 30 1.0
26 30 1.0
我们一般都用梯度，除了正相的用恒流

首先，基线不是很好，在305nm的波长下不是梯度不应该基线这么差，估计是你用的溶剂极性太低。如果可以的话，能否用异丙醇，甲醇，乙腈之类的溶剂代替掉三氯甲烷？如果你想看3分钟那个峰的结果，本身这个时间跟溶剂峰的出峰时间很接近，需要适当调节流动相里面乙腈的比例，如果这样引起了检测时间的延长，建议这样设置一个梯度：初始比例50：50（H2O：ACN），保留5分钟——因为你基线不好，基线好的话不用保留5分钟了——然后5-20分钟，改变比例到5：95（H2O：ACN），20-35分钟保持比例，35-36切换到初始比例，稳定几分钟，然后进下个样。初始比例和初始保留时间可以适当调整，最好使你要的杂质在等度状态下出来。其实现在最需要注意的是：你基线怎么这么差。305nm的波长，没梯度，不应该的啊？难道你用的低压四元梯度，然后用的两个通道走的5：95？这样的话比例阀切换的是不太准的。

基线不好跟楼上说的四元梯度用两个没有什么关系，因为我们一直都是这么用的，基线走的都比较好

两个建议;
换250cm柱子试试
减小供试品浓度，因为主峰拖尾，而且主峰峰面积已经是7位数了吧，我没看错的话

1、改变流动相比例，乙腈：水试试85：15比例
或者使用甲醇水，理论上来说乙腈的洗脱效果比甲醇强

2、换一根柱子试试，25cm的效果肯定比15cm的好

另外，你的峰好像有点拖尾
自己小心点

我们也天天这么走，也没事。不过我只是说其中的可能。你们天天走，你试过初始比例就95%的乙腈么？低压梯度，如果你走99：1，两个通道的流量是肯定不稳定的，不信你试试，95%的话就看仪器的质量了，不好说。