在两位版主的指导下，为了完善本文，特补充实例来支持文中的理论，如果各位有什么意见 或者建议，还可以提出来。

事先声明：我是来挨拍的。

全反式维甲酸中有很长的共轭结构，照理来说紫外吸收应该比较好，采用常规的HPLC血浆极限应该可以至少测到10-50ng/ml，如果不是做人血样的，可能用液质有些浪费。你的质谱图1ug的图(我不知道是血浆样品还是纯标)，离子流很大，峰面积才5000多(没看错吧我)，照这样算下去，LOQ也就2ng。如果你峰上面不喜欢标峰面积，标的是信噪比，我道歉，当我没说。

（waters的MS就是稳定，就算峰面积只有10，也能拿来定量！）

另外，从结构上说，维甲酸应该是用酸沉淀比较好，高氯酸或三氯醋酸，回收率很高。为了避免基质效应，用提取法的话，即使采用酸化再提取，估计回收率也不会太高。不过我没有看到楼主做的方法学，不太好下结论。

另外，关于基质效应的话，我觉得和楼主用的柱子和液相方法有一定的关系。你样品在2min前后出完，这个时候蛋白肯定是没有出完的，常规柱都要差不多3min左右蛋白才能跑净。如果把液相色谱柱和液相条件调整一下的，我觉得会更好一些，采用酸沉淀也能避免基质效应，可能样品的稳定性也会好一些。

内标物的选择，在血样的处理时候必须要考虑两个方面。一个是质谱的响应，也就是楼上各位讲的。我曾经碰到过，进样一个月，样品响应越来越小，内标响应越来越大，全部返工，痛啊。

另外一个，是在血浆样品处理当中，用于抵消处理方法、步骤造成的损失，为什么喜欢用同系物，就是物理性质比较类似、pKa接近，提取回收率比较接近、稳定性接近等等方面。

感谢你提出的这些问题，没有人拍你。我一一回答，看看能否回应你的提问。

首先我分析的不是血浆里面维甲酸的浓度，至于哪种基质，涉及到课题的安全性，暂且保密，我们在此只讨论学术性的问题。你说的定量下限很对，waters的这套仪器，采用了1.7um粒径的填料作为固定相，柱效大大提高，所以峰面积虽然不大，但是信噪比却能满足定量要求。

第二个是样品处理方法的问题。我们考察了沉淀蛋白法，但是结果差强人意。主要是背景噪音很高，能达到400多，这肯定不能达到检测灵敏度的要求。所以我们又尝试啦液液提取法，考察了多种提取试剂，最终选择了一种，提取回收率在80%左右。

第三个就是基质效应的问题。你所说的基质一般在3min左右出完，这只是一般情况。对于这个试验，特殊就在于使用了UPLC的2亚微米粒径填料的色谱柱，我们做的项目多数都在1min到2min出峰，而且我们也考察了基质效应，结果显示基本没有，否则我们的方法学确证也就无法完成。如果你还是有所怀疑，那么你可以查阅一些使用该仪器发表的一些关于生物样品分析的文章，还有一些在0.7min左右出峰，但同样的是基质不干扰待测物的测定。

如有问题，我们可以继续讨论，再次感谢你的关注。

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请教楼主一个问题，既然该化合物呈酸性，流动相中加入乙酸不是会抑制该物质的离子化么？从理论上来讲，应该加入乙酸铵之类的缓冲盐，将pH值调得稍高一点吧？谢谢！

谢谢楼主提供这么好的交流学习平台,由于我是一个液质菜鸟,所以提不出什么好建议,但我能学到好多,以后还会向各位高手多多请教的!谢谢啦

写的很好，希望大家多多学习
我自己也长了很多知识，谢谢

是这样子的，液相色谱分离和质谱检测是一个矛盾体。色谱分离要求化合物呈游离状态，对于酸而言就要求在酸性条件下才能呈游离状态；而对于质谱检测而言，需要检测离子，即需要化合物能够很好的离子化，这对于酸而言就需要在碱性条件下较好。对于这样矛盾的体系，我们就只能兼顾考虑，那么最好选择在化合物的pKa值附近，上下不超过1。
不知道我说的有道理没？有问题继续发帖。

支持楼主！
学习中~
如果能把这样的主题做成一个系列就好了。

谢谢您的回复！再请教一个问题，在液相中有一种说法，流动相的pH应避免选择在待分析物的pKa±2的范围内，因为这时该化合物呈游离和离子两种状态，会引起峰形问题，不知道实际中是不是这样？既然您的pH在pKa±1，那么您提到的“对峰型的改变”是一种怎样的改变呢？应该是比较过多种pH的情况下得出的结论吧？谢谢！