村长
第49楼2009/05/05
简单的从色谱柱分离机理角度谈一下:造成拖尾的原因多数是因为要分离的化合物是碱性的。硅胶表面的硅羟基pKa值是2-3,也就是当流动相的pH值大于这个值,硅羟基就会解离,这时这个氧带的外层电子对碱的吸附是特别强的,很多人知道硅羟基对碱性物质吸附,就是这个原因。那么就应选择封尾的柱子,但是即使封尾,不管工艺怎么好,都不会是100%能封住。那么就争取从pH值角度考虑,减小流动相pH,或者说加三乙胺,三乙胺容易被这个解离的硅羟基吸附,其实作用相当于对色谱柱封尾。从流动相的角度考虑用甲醇做碱性物质要相对比乙腈好,因为甲醇含有-OH,多少能抑制硅羟基解离,加缓冲盐的目的也是抑制硅羟基解离。所以说种种方法都是抑制硅羟基解离或竞争吸附,尽量减少解离的硅羟基对碱性物质的吸附。
前面第二个前沿峰图,非常有可能是色谱柱的硅胶溶解造成的。前沿峰还有可能是由溶解性效应引起,就是溶解样品的溶液对样品的溶解性远大于流动相。
现在市场上有种色谱柱经过表面处理之后残留的硅羟基pKa值能达到5.5-6我不说哪家生产的,用这种柱子做你的流动相pH控制在5.5以下拖尾的效果非常好,另外建议做碱性化合物时选择色谱柱尽量选择比表面积小,含碳量低些的色谱柱,效果会好。
其他的原因及解决方法楼上说的已经很详细。