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  • 神话

    第11楼2009/08/25

    不同的样品温度的变化影响会很大.我做做过一个品种罗红霉素他的保留时间就随着温度变化而变化的

    zlzlp2009 发表:我那没有柱温箱,但之前测其他样品的时候保留时间变化不大!
    再说温度影响有那么大嘛?

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  • 神话

    第12楼2009/08/25

    关于梯度需要增加
    1、用极性大的走5分钟；
    2、改回初始比例；
    3、平衡初始比例。

    温度是有影响的，有柱温箱的话应该能控制住。

    PH值是很重要的，你还是耐心的再看一下有问题没！

    色谱柱看用多长时间了，看峰、柱压等。一般问题不大！

    实验还可以灵活的自己调节下比例什么的。。。。

    zlzlp2009 发表:刚才老兄你说的PH,我每次测量时都用PH计矫正,应该问题不大.再者梯度的话,我把程序给你看下
    时间 流速 A B
    0min 1ML/MIN 92 8
    6MIN 1ML/MIN 92 8
    7MIN 1ML/MIN 76 24
    20MIN 1ML/MIN STOP
    柱子的话,我想检测,不知道怎么测量柱效呢?换柱子的话没条件呢!

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  • 〓猪哥哥〓

    第13楼2009/08/25

    梯度变化很快，从6-7min之间。7min以后都是 76：24吗？建议再优化梯度。

    zlzlp2009 发表:我不能不急阿,这个标样我已经跑了一礼拜拉,还没解决.
    刚才老兄你说的PH,我每次测量时都用PH计矫正,应该问题不大.温度的话,我们只能用恒温箱控制,没有其他好的方法,条件有限.再者梯度的话,我把程序给你看下
    时间 流速 A B
    0min 1ML/MIN 92 8
    6MIN 1ML/MIN 92 8
    7MIN 1ML/MIN 76 24
    20MIN 1ML/MIN STOP
    关于其他的,机器,没什么大问题.今天他们用正相的测,测出来的效果不错.柱子的话,我想检测,不知道怎么测量柱效呢?换柱子的话没条件呢!

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  • david03052120

    第14楼2009/08/25

    时间 流速 A B
    0min 1ML/MIN 92 8
    6MIN 1ML/MIN 92 8
    7MIN 1ML/MIN 76 24
    20MIN 1ML/MIN STOP

    你的梯度有问题，初始比例为92：8，而20min结束时为76：24，不能返回到厨师比例，使得你下一针进样时，是在76：24这个比例下进行的洗脱。
    这就解释了咖啡因飘动大的原因

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  • david03052120

    第15楼2009/08/25

    既然阿魏酸的保留时间为14min。建议你在15min后改变流动相条件为92：8

    时间 流速 A B
    0min 1ML/MIN 92 8
    6MIN 1ML/MIN 92 8
    7MIN 1ML/MIN 76 24
    15MIN 1ML/MIN 76 24
    16MIN 1ML/MIN 92 8
    20MIN 1ML/MIN STOP

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  • pandora98

    第16楼2009/08/25

    1. 先排除一下是不是仪器的问题，可以看看仪器压力稳定不稳定，几天之内有没有重复性，看看流速和流量有没有问题。每天都标一针溶剂，最好是甲苯，看一下甲苯峰重复性怎么样，如果甲苯能重复，则说明系统没有问题，可能是方法的问题
    2.乙酸铵应该是比较稳定的，我们一直在用，没出现过你所讲的问题，每天不同仪器的保留时间重复性都很好。
    3.梯度最好是再优化一下，把梯度结束以后的平衡时间延长几分钟再看

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  • zlzlp2009

    第17楼2009/08/25

    请问一下,按照你的意思,我怎么设置呢?
    对于这个我不是很熟悉!请求你的帮助.
    我还想请问下,怎么我后面一段跑的面积也不成比例的?当然,保留时间也是存在比较大的差异.这个问题也与前面设置有关嘛?

    david03052120 发表:时间 流速 A B
    0min 1ML/MIN 92 8
    6MIN 1ML/MIN 92 8
    7MIN 1ML/MIN 76 24
    20MIN 1ML/MIN STOP

    你的梯度有问题，初始比例为92：8，而20min结束时为76：24，不能返回到厨师比例，使得你下一针进样时，是在76：24这个比例下进行的洗脱。
    这就解释了咖啡因飘动大的原因

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  • zlzlp2009

    第18楼2009/08/25

    梯度洗脱原始程序
    这是梯度洗脱原始程序,有人按照这个程序已经做出来拉!
    我这个程序与你这个区别在哪里呢?
    高效液相色谱仪 岛津LC-10AT VP
    两泵

    还想请问下,你的15MIN那一步必须要嘛?
    不可以直接进入16MIN那步嘛?

    david03052120 发表:既然阿魏酸的保留时间为14min。建议你在15min后改变流动相条件为92：8

    时间 流速 A B
    0min 1ML/MIN 92 8
    6MIN 1ML/MIN 92 8
    7MIN 1ML/MIN 76 24
    15MIN 1ML/MIN 76 24
    16MIN 1ML/MIN 92 8
    20MIN 1ML/MIN STOP

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  • zlzlp2009

    第19楼2009/08/25

    每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始的状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相和初始流动相达到完全平衡！
    请问下这段话的意思是让我每进一针样就冲半个小时,还是每天只要开始的时候冲洗半小时就行拉?
    谢谢!

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  • icefire2009

    第20楼2009/08/25

    非常感谢，那周走人

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