农药残留检验方法系列讲座（29）（下）-中药 柱后衍生法测残留

参考文献

1 Krause，Richard T. High － performance liquid chromatographic determination of aryl N- methylcarbamater residue using post-column hydrolysis electrochemical detection. J Chromatogr． 1988，442，333

2 Yu Wenlian（于文莲），Wang Chao（王超），Chu Xiaogang（储晓刚）, Simultaneous determination of carbamate pesticides in cereal by high Performance liquid chromatography with post-column Florence derivation（高效液相柱后衍生法测定谷物中9种氨基甲酸酯类农药及3种代谢物残留量）．Chin．J chromatogr（色谱），1998，16（5）：430

3 Zhang Shunming（张曙明），Guo Huaizhong（郭怀忠），Chen Jianmin（陈建民）．Determination of organochlorine pesticide multiresidues in Astragalus membranaceus（Fisch．）Bge．Var，mongholicus（Bge．）Hsiao，panax notoginseng（Burk。）F，H．Chen and P，quin quefolium L．（黄芪、三七和西洋参中多种有机氯农药残留分析）．China J Chin． Med（中国中药杂志），2000，25（7）：402

4 Xue Jian（薛建），Chen Jianmin（陈建民），Du Zhigang（杜志刚）．Analysis of residual amount carbofuran in betel palm（槟榔中克百威的残留分析）．Pesticide（农药），1989，28（1）：35

5 Dong Shunling（董顺玲），Hu Jiachi（胡家炽），He zhiqiang（何志强），et．al，RP-HPLC determination of residual amont of aldicarb，carbofuran and carbatyl in Chinese crude drugs（中药材中氨基甲酸酶类农药残留量的反相高效液相色谱法）．Chin J Pharm Anal（药物分析杂志），2002，22（3）：178

农药残留检验方法系列讲座（30）-枸杞中的农药残留
枸杞中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的测定



摘 要：建立了用配有氮磷检测器（NPD）的气相色谱仪测定枸杞中敌敌畏、氧化乐果、久效磷、乐果、马拉硫磷、对硫磷、克百威、抗蚜威8种农药残留量的方法。试样用乙腈提取，加氯化钠，使水相与有机相分层，取一定量有机相浓缩、定容。采用外标法定量。该方法的检出限为0.0 016 mg／kg～0.021 mg／kg，8种农药的添加回收率为83.3%～116%，测定的相对标准偏差为1.23％～13.8％。方法简便、准确。



前 言

近年来，枸杞产业发展很快，枸杞产量逐年增加。但由于枸杞含糖高及其生长、生理特性，导致其病虫害多。日前防止措施仍然以化学农药为主，大量使用有机磷、氨基甲酸酯类杀虫、杀螨农药，造成枸杞质量下降，环境污染，农药残留超标，因此必须建立一个完整的监测体系。目前枸杞中有机磷、氨基甲酸酯类农药残留量的检测方法尚无报道（2004.12）。



本文由农业部枸杞产品质量监督检验测试中心的张 艳，苟金萍，程淑华，王晓菁等研究人员，利用乙腈提取[1]，加氯化钠使水相与有机相（乙腈相）分层，然后取一定量有机相直接浓缩、定容，在GC- NPD仪器上对敌敌畏、氧化乐果、久效磷、乐果、马拉硫磷、对硫磷、克百威、抗蚜威8种农药残留量进行同时测定，方法快速、简便、实用。现全文介绍如下：



实 验

1 材料与方法

I．1 仪器与试剂

仪器 GC-14C气相色谱仪（日本岛津），配NPD检测器；BPX－35型石英毛细管柱：30m×0.32 mm×0.25μm（SGE公司）；高速组织捣碎机；匀浆机；氮吹装置；六联恒温水浴锅。

试剂 敌敌畏、氧化乐果、久效磷、乐果、马拉硫磷、对硫磷、克百威、抗蚜威标准储备液100μg·mL－1（中国标准技术开发中心）；高纯氮气（纯度≥99.99%）；乙腈、二氯甲烷、丙酮（重蒸）、正己烷（重蒸）、氯化钠、无水硫酸钠均为分析纯；水为蒸馏水。

l．2 分析步骤

试样制备 枸杞鲜果用高速组织捣碎机制成匀浆．置于具塞聚乙烯广口瓶中冷冻（≤一18℃）保存；枸杞干果在冰箱中冷冻（≤—18 ℃）24 h以上取出立即粉碎．置于具塞聚乙烯广口瓶中冷冻（≤一18℃）保存

试样提取 称取枸杞鲜果25.00 g (或枸杞干果10.00g，加15.0ml，蒸馏水，振荡1min。使糖分溶解），于100ml烧杯中．加入50.0 ml乙腈，匀浆3min 后，过滤于盛有5~7g 氯化钠的l00mL具塞量筒中，收集滤液40~50 mL，盖上塞子．剧烈振荡l nim，在室温下，静置1 h以上、使乙腈相与水相充分分离。准确吸取上层乙腈相10.0ml于50mL小烧杯中、放置在80℃水浴中用氮吹法使共挥发浓缩近干．用丙酮和正己烷（l:l V/V）溶解残渣并定容5.0 mL．待GC测定用。

l，3 色谱测定

柱温采用2步程序升温，初始温度140℃以l0℃／min的升温速率升至210℃，再以l℃／min的升温速率升至220℃ (保持2min）；进样口温度260℃;；检测器温度290℃；载气为氮气．流速为5mL/min；氢气流速为4.8 mL／min；空气流速为150 mL／min：进样量1μL采用面积外标法定量。

按仪器条件，对标准工作液和样品等体积进样，根据峰面积用外标法定量。8种农药标准品色谱图见图l。


1．DDV 2. 氧化乐果 3. 久效磷 4. 克百威 5. 乐果 6. 抗蚜威 7. 马拉硫磷 8. 对硫磷

图-1 8种农药标准品的气相色谱图



2 结果与讨论

2．1 样品提取

传统方法为试样用二氯甲烷加适量无水硫酸钠振荡提取[2] 过滤．分取一定量体积．浓缩定容。此方法定容样液浑浊，色素（枸杞红色素）重，对色谱柱、检测器易造成污染．从而降低柱效和检测灵敏度，而试样用乙腈提取．克服上述方法的不足，在枸杞干果提取时，考虑枸杞干果含糖量高·先加入一定量蒸馏水．使试样中的糖分充分溶解．再加入乙腈，匀浆提取效果更好。采用乙腈法，提取液经净化还可同时测定枸杞中菊酯类和有机氯类农药。

2．2 标准工作曲线的绘制

将试剂中的各种农药标准储备液，用丙酮逐级稀释，配制成8种农药的系列混和标准工作液，浓度为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0μg·mL－1，在1．3中的色谱条件下进行测定。结果表明，在00.l～1.0μg·mL－1浓度范围内．各组份的浓度与峰面积成线性相关，相关系数为0.9994～0.9 999。

2，3 检出限

称取l0.00 g未施农药的枸杞样品，添加敌敌畏、氧化乐果、久效磷、乐果、马拉硫磷、对硫磷、克百威、抗蚜威8种农药的标准混和溶液、添加水平为0.05mg·mL－1（即样本溶液定容后各农药的浓度），按1．2，2节的方法进行提取，定容体积为5.0mL进样量μL。根据每个农药的最小检出量（在实测未施药对照样本条件下、相当仪器二倍噪声峰高的农药量）、样品质量、定容体积和进样体积计算出每个农药的最小检出浓度即检出限[3] ，8种农药的检出限量见表1。

农药残留检验方法系列讲座（30）(下)-枸杞中的农药残留

从表l看出．8种农药的添加回收率为83.3％~1l6％，测定的相对标准偏差为1.23％～13.8％、符合农药残留分析方法的要求。



2．4 回收率及精密度

向不含农残的枸杞试样中添加敌敌畏、氧化乐果、久效磷、乐果、马拉硫磷、对硫磷、克百威、抗蚜威8种农药的标准混和溶液，空白试样中各农药的添加水平分别为0.05、0.l、0.5 mg·kg－1，按1．2的方法进行测定，试验重复5次，回收率试验结果及精密度见表1。枸杞空白的气相色谱图见图2。

2．5 样品分析

采用本方法对16份枸杞样品进行测定，其中6份样品中敌敌畏、对硫磷被检出，且高于该农药方法检出限。枸杞样品的气相色谱图见图


3 结论

本方法简便、快速，试剂用量少，适用于在短时间内大批量样品的分析，也可用于测定枸杞中其它有机磷、氨基甲酸酯类农药的残留量。



参考文点·

1. 吕保英，邵俊杰 食品分析大全k第一卷9［M］，北京：高等教育出版社，1997，20～29

2. 中国标准出版社第一编辑室，农药残留国家标准汇编［M］．北京：中国标准出版社，1999 58～67

3. 李本昌，高晓辉，吴玉环，农药残留量实用检测方法手册（第一卷）LM］ 北京：中国农业科技出版社，1995, 28～31



摘自《西北农业学报》 2005,14 (2) (全文完)

农药残留检验方法系列讲座（31)-鸡蛋中有机氯残留

气相色谱法测定鸡蛋中有机氯农药残留



前言

有机氯农药自20世纪初合成以来，曾大量用于农业生产，促进了农业产品产量的大幅度提高。但由于有机氯农药稳定性强，在环境中不易降解，并有超强滞留性以及其在脂肪中的高度储积性，已被发达国家相继禁用。我国于1983年停止生产并于1986年在农业上全面禁止使用有机氯农药。在禁用20年后的今天，仍可从各种环境介质样品中检出有机氯农药的残留物，部分样品中的检出量还相当高。不但我国情况如此，而且在禁用时间比我国长得多的发达国家，至今仍可从环境中检出有机氯农药的残留物。

有机氯农药的残留物在鸡类食物链的传递、富集过程中，有可能进人鸡蛋并积累于其中。因此怎样方便、快捷、准确地测量农副产品中的农药残留，目前已成为科技界探讨的问题之一。



本文由山东省医学科学院药物研究所的王秀丽同志利用GC-ECD测定鸡蛋中666、DDT的残留取得了满意的结果。也说明有机氯的滞留性、储积性相当严重。现全文介绍如下



l 试验方法

l．1 仪器

GC-HEWLEIT 6890气相色谱分析仪：超声波震荡仪：K-D浓缩器：高70cm、直径为3cm的玻璃层洗柱。

1．2 试剂

正己烷（分析纯）；无水硫酸钠（分析纯）；氧化铝（经50℃灼烧4h）；8种有机氯农药的标准溶液，精密称取：α－666、β－666、γ－666、δ－666、P.P’－DDE、0.P’－DDT、P.P’—DDD、P.P’－DDT各异构体用正已烷配制成20mg／L的标准贮备溶液冰箱保存。

8种有机氯农药的混合标准溶液见表1。



1．3 测定步骤

1．1．1 样品提取

精密称取去壳搅拌均匀的鸡蛋5g，放置于三角烧瓶中加lg无水硫酸钠，20ml正己烷浸泡30min后，超声波震荡l0min，静置3min后，定量滤纸过滤，20ml正己烷3次洗涤将滤液置入烧杯，电热包30℃加热浓缩至5ml后，上氧化铝柱进行净化，用正己烷做洗脱剂，收集净化液，再次在30℃电热包上浓缩至5ml，将浓缩液转人K－D浓缩器中通人高纯氮吹至lml，供色谱分析。

l．3．2 色谱条件

电子捕获检测器、毛细管柱HP-5，30m× 0.25mm×0.3μm；柱温为210℃；汽化室温度为250℃；检测室温度为250℃；载气流速为高纯氮37ml／min。

l．3．3 校准曲线的绘制

取配置好的DDT、666的6个混合标准样各取lμL注入气相色谱分析仪中，以峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，求得相关系数 γ＝9.999。

1．3．4 样品测定

将处理好的样品取lμL注入气相色谱分析仪中，以保留时间定性，以峰面积从校准曲线上分别查出DDT、666各异构体的浓度。



2 结果与讨论

2，1 回收率 见表2。


2，2 鸡蛋中8种有机氯农药的残留量（ng／g） 见表3。




气相色谱法测定水、土壤、粮食、蔬菜中的有机氯农药残留的报道较多，但肉、鸡蛋内的农药残留的测定报道较少，原因是二次代谢后的含量较低，一般方法不易测得。本文参考了《车间空气监测检验方法》及《水质分析大全》的部分实验方法、加强改进了样品提取过程，在大量的实验过程中不断完善了气相色谱测定鸡蛋中有机氯农药残留的方法。此法准确度高，由于采用了较先进的超声波震荡提取、分析前上柱净化等手段，消除了较多杂质干扰峰，测得结果令人满意。



无参考文献

（全文完）



注意：本文摘自《家禽科学》2005年第一期文章，其中二张色谱图似人工描绘过，不规范不够准确仅供参考！

农药残留检验方法系列讲座（32）-残留快速检测方法研究


米、面、果、蔬中农药残留现场快速检测方法的研究



摘 要 一种用于大米、面粉、水果、蔬菜等样品中有机磷和氨基甲酸酯类农药的现场快速前处理方法和化学试剂盒分析。讨论了影响现场快速检测的主要因素，对大多数有机磷和氨基甲酸酯类农药的检出下限可达0.1～3.0 mg／kg。



1引言



有机磷和氨基甲酸酯类农药是我国目前使用量最大的农药，多使用在果蔬作物上。甚至违规用于农产品和食品表面杀虫、杀菌等，此类农药残留大量吸人将引起人的神经传导阻碍、神经麻痹乃至中毒死亡。为控制高残留农药的农产品上市，在上市前进行快速检测具有十分重要的意义。

对蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测，国内大都采用速测法：和分光光度酶抑制率方法①~③，其中国标准方法（GB／T5009．199－2003）已于2004年1月实施④，这些方法虽然具有省时、省力、省成本，能进行现场检测的优点，但只能用于水果和蔬菜样品的初筛⑤。



本文是吉林省科技发展计划资助重大项目“多参数食品安全现场快速分析仪产业化”课题的部分内容，由吉林大学化学学院分析化学系和小天鹅仪器有限公司的冯国栋、王兴华、谢菲、于爱民等数位研究人员采用一种现场快速前处理农产品和食品样品的方法，研制出用于农药残留现场快速检测的化学试剂盒方法。适用于不同样品中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的现场快速检测。，具体介绍如下：



2 实验部分



2-1 仪器与试剂

GDYN-206S农药残毒快速检测仪、GDYQ－703S食品检测-快速分离仪、 GDYQ－701S食品检测-快速超声提取仪，（长春吉大·小天鹅仪器有限公司）；农药残留化学试剂：按文献国标法（GB／T5009．199－2003）④ 分装操作配制。具体配制方法如下：

1）农残试剂（－）

将农残试剂（一）固体试剂全部倒入500ml塑料滴瓶中，然后加入500ml二次蒸馏水（或纯净水）使之溶解并摇匀（或用蒸馏水稀释至500ml塑料滴瓶标签指示的刻度线处使之充分溶解摇匀）即可使用。

2）农残试剂（二）

将农残试剂（二）真空玻璃瓶（溶质）尖端用小砂轮片划一下并打开，将随注射器所带的长针头安装到1ml注射器上，用此1ml注射器将瓶内的溶液全部取出并注人标有农残试剂（二）的塑料滴瓶（黄盖）中，然后将农残试剂（二）塑料滴管尖端（溶剂）剪开，将塑料滴箱中的溶液全部滴入标有农残试剂（二）的塑料滴瓶（黄盖）中。然后盖紧滴瓶瓶盖摇匀，备用（真空玻璃瓶与塑料滴管中溶液转移前应将尖端处溶液用手指弹下再打开与剪开，转移后应用混合液反复洗涤玻璃瓶与塑料滴管和注射器内壁二次）。

3）农残试剂（三）

将农残试剂（三）塑料滴管剪开并将滴管中的固体试剂全部洗入到标有农残试剂（三）的50ml方型塑料瓶溶液中，盖紧瓶盖，摇动使之充分溶解混匀即可使用。

4）农残试剂（四）

将农残试剂（四）塑料滴管剪开并将滴管中的田体试剂全部洗人到标有农残试剂（四）的50ml方型塑料瓶溶液中，盖紧瓶盖，摇动使之充分溶解、混匀、备用。

5）农残试剂（五）

无需配制，直接使用。

6）农残试剂（六）

将取一袋农残试剂（六）固体试剂全部倒人100毫升塑料方瓶中，用蒸馏水稀释至100毫升塑料方瓶上标签指示的刻度线处使之充分溶解混匀即可使用。



2-2 米、面样品快速前处理方法

用便携式电子台秤准确称量样品5.0 g于20毫升的烧杯中，加人磷酸缓冲溶液（pH＝7.5）20 mL，然后置于超声提取仪中提取l0分钟，取提取后的溶液于快速分离仪中离心1分钟，然后取上清夜，用微孔滤膜过滤，滤液作为农药残留的待测溶液。



3 结果与讨论



3-1 样品的制备和残留农药的提取

3-1-1 蔬菜、水果

选取有代表性的果蔬样品，擦去表面泥土。叶菜（如菠菜、油菜、白菜等）用叶菜取样器取叶片部分；果实蔬菜（如黄瓜、茄子、西红柿等）用带刮皮器的水果刀顺皮削下一片，然后切成1厘米左右见方碎片，用随机所带的感量为0.01克电子台秤，称取样品2 g（台秤在使用前应用砝码校正准确后再用）。将6个样品提取瓶分别置于样品提取瓶支架上，向每个样品提取瓶中放入2.0克样品，用5.00毫升移液器移取10.0毫升农残试剂（一）分别置于6个装有样品的提取瓶中。用6个搅拌针分别将样品压人提取液中，使提取液浸没样品，然后将样品提取瓶放入拌品提取仪中超声波萃取6分钟（在GDYQ－701S样品提取仪中预先加人500mL蒸馏水或去离子水后，再放入塑料篮，然后用6孔蓝色塑料盖压紧塑料篮固定）。然后将6个比色瓶置于比色瓶固定架上，用5.00毫升移液器分别移取样品提取液的上清液1.00毫升于6个比色瓶中，待测。



3-1-2 大米、麦片

称取5g大米或2g麦片样品放入干净并干燥的样品提取瓶中，再分别向其中加5 mL农残试剂（一）和农残试剂（五）100微升、农残试剂（六）500微升（用100－500微升移液器加人），搅拌均匀。超声波萃取6分钟，再将样品提取瓶中的溶液转移到3个离心管中，离心2分钟（将3个离心管三点对称间隔放人GDYQ 706S食品检测-快速分离仪的转子固定孔中，稍微压紧，盖紧盖子）。用带长塑料管吸头的5 mL注射器抽取3个离心管中的上清液，将长塑料管吸头换成己装好滤膜的注射式过滤器，把溶液过滤到另一个干净并干燥的样品取样瓶中，用移液器移取过滤后的溶液I mL至比色瓶中，待测。



3-1-3 红豆

称取5g样品放人干净并干燥的样品提取瓶中，再分别向其中加5 mL农残试剂（一），搅拌均匀。超声波萃取6分钟，用移液器移取过滤后的溶液1 mL 至比色瓶中待测。

3-2 样品中农药的提取温度和提取时间的选择

以大米为样品，通过检测不同温度、不同提取时间，所得到的抑制率来选择，所得结果见图1和图2。从图1和图2可见，超声提取时间达6分钟时，抑制率不再增加，而样品的提取温度在10~30℃范围抑制率变化较小，高于30℃时抑制率有所降低。

农药残留检验方法系列讲座（32）（下）-残留快速检测方法研究


4 农药检出限及抑制率



本文研究了二十多种不同浓度农药与酶的抑制关系（见表1）。由表1可见，不同农药的结构和化学性质的不同，对酶的抑制程度差别较。实验表明，对大多数农药当抑制率为2.5%时，不同农药的检出浓度在0.1－3.0 mg／kg范围内。





研究还发现，采用蔬菜叶表面为基体，试验农药的回收率，对大多数的回收率在50－60％左右（见表2），为了表征农药是否通过蔬菜叶表面渗人蔬菜中去而损失，我们选择了三种不同的叶菜和铝箔，在其表面分别加人相同浓度的敌百虫农药，放置l 0分钟后，再进行农药残毒检测，所得结果见表2。由表2可见，铝箔上加入高浓度农药时，农药对酶的抑制率要比蔬菜叶表面农药对酶抑制率高，说明农药可能通过叶菜表面渗入蔬菜中一部分，但不能排除农药在样品前处理过程中损失的可能性。



5 结论

采用超声提取-离心分离技术，可实现大米、面粉、蔬菜、水果等食品表面有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测，但尚未解决有机氯和菊酯类农药快速检测以及辛辣物质对检测干扰等问题，尚有待于进一步研究。

参考文献

1 黄文风等，酶催化动力学光度法快速测定蔬菜中农药残留毒性，现代科学仪器，2000〈2）

2 王恒亮等．酶活性抑制测定农药残毒技术研究，河南农业科学，1997（1）

3杨东鹏等酶抑制分光光度法检测蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残留方法的研究，2004，20〈4）

4 中华人民共和国国家标准，食品卫生检验方法，理化部分（二）2003，569

5 王品、王林、黄晓蓉主编，食品安全快速检测技术，北京：化学工业出版社，2002，32

农药残留检验方法系列讲座（33）-微波-GC测大葱中农药残留


大葱中25种有机磷农药多残留

的微波净化-气相色谱测定





摘 要：采川微波净化去除大葱中硫醚干扰、气相色谱－火焰光度检测（GC-FPD）实现了大葱基质中25种有机磷农药多残留的快速检测。 25种有机磷的加标回收率为85.2%～119. 6%，相对标准偏差为2.1％～14.8％ 。大多数农药在0.1～5.0 mg／L范围内线性关系良好，相关系数不低于0.9910，检出限为0.025～0.200 mg／L。



前 言

随着生活水平的提高，人们对食品安全越来越重视。 我国的绿色食品标准中规定了大葱中的农药残留量，国外也对大葱进行多项农药残留检测[1，2] 。大葱本身含有硫醚类化合物．按照蔬菜通用的有机磷农药残留分析方法对其进行检测，会产生极大的背景干扰，尤其是检测多种农药残留时更是无法进行[3-6] 。对此类样品的分析．曾有相关的报道。但有的方法存在样品的前处理过于复杂，要采用成本较高的固相萃取柱；有的方法所测农药的品种较少[7] ；有的方法采用昂贵的仪器，如气相色谱一质谱（GC-MS）、气相色谱—原子发射光谱检测（GC-AED）[8-10] 等。本研究采用简单快速的微波处理、匀浆提取、—次液－液分配的样品前处理步骤，省略了固相萃取过程，降低了成本，采用通用的气相色谱－火焰光度检测（GC－FPD）实现了复杂基质中25种有机磷农药残留的快速检测，针对大葱中有机磷

农药的检测涉及的农药品种较前人[7] 有了大幅度提高。本方法的优点是快速简单，适于推广，能够解决国内及部分进出口大葱的农药残留的快速检测难题，应对发达国家的贸易壁垒。



本文由大连市产品质量监督检验所的姜俊、李安、李海燕、佟克兴、周丽丽、周慧敏和赵彤共同完成大葱中有机磷类农药的定量检测方法，现全文介绍如下：



实 验

1 实验部分

1．1 仪器与试剂

Agilent 6890N气相色谱仪，配火焰光度检测器（美国Agilent公司）；WD800型微波炉（800 W，广东顺德格兰仕微波炉电器公司）；RE2000旋转蒸发器（L海亚荣生化仪器厂）；XW－80A旋涡混合器（上海精科实业有限公司）

乙腈、丙酮（农残级，德国 Merck公司）；氯化钠（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）；无水硫酸钠（分析纯。650℃下烘干6 h后使用，天津市博迪化工有限公司）。

有机磷农药标准品：表1 所列出的25种有机磷标准品均购自德国Dr．Ehrenstorfer GmbH公司，纯度均大于96％。用丙酮将其稀释至约400mg／L，贮存于冰箱中 根据农药的性质及色谱保留时间对其进行分组（分组情况见表1），临用时将其稀释至适当浓度。



1．2 分析条件

色谱柱：DB－1701熔融石英毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm，美国Agilent公司）；色谱柱前加去活预柱（去活熔融石英毛细管，lm×0.25mm，美国Agilent公司）；柱温：于40℃下保持1min后以30℃／min的速率升温至130℃，再以10℃／min的速率升温至300℃，保持5 min；载气：氮气（纯度不低于99.999％），流速为l.2 mL／min；进样口温度：290℃：进样方式：不分流进样，0.75 min后打开吹扫阀；检测器温度：250℃；检测器气体：空气，110 mL／min；氢气，70 mL／min；滤光片：P 滤光片；进样量：1 μL。



1．3 实验方法

称取20.0 g（切成约0.5 cm的小段）有代表性的大葱试样，使用功率为800 W的微波炉，于80％功率下微波30 s．冷却后加人50 mL乙腈，高速匀质2 min后用滤纸过滤，滤液收集到装有 7 g 氯化钠的50 mL具塞量筒中，收集滤液40～50mL，盖上塞子剧烈振荡1 min，静置l0 min，使乙腈相和水相因盐析分层。 从具塞量筒中准确吸取25 mL上层乙腈溶液。过无水硫酸钠、于40℃下旋转蒸发近干．用丙酮定容至 2 rnL．，在旋涡混合器上混匀后供色谱测定，采用外标法定量。



2 结果与讨论

2．1 农药的分组

由于本文涉及的农药品种较多，有许多难分离物质对，同时多种有机磷农药共存会对标准溶液的稳定性产生影响[11]。为了降低农药之间的相互干扰和便于操作，在查阅相关资料[3，12] 的基础上，采用单一标准品进样测定保留时间，然后根据农药的性质和保留时间进行了分组，同时剔除不稳定和极不灵敏的农药，如完灭硫磷等。农药的分组情况及保留时间见表1，有机磷农药标准品在“1．2”节条件下的色谱图见图1。按色谱检测的惯例，如果检验结果出现疑义，应采用其他检测器或色谱柱进行确认。





2．2 线性范围、检出限

按表1分组，在大葱空白捉取液中配制质量浓度分别为0.1，0.2，l.0，2.0，5.0 mg／L的有机磷农药混合液、在“1．2”节分析条件下进行测定．用峰面积对质量浓度作图，得到线性相关系数和线性范围，按信噪比（S／N）大于3计算检出限．结果见表1



2．3 微波净化条件的确定

2．3．1 大葱基质干扰消除的微波时间和功率

称取空白大葱20.0 g，使用功率为800 W的微波炉，分别在微波10 s（80％功率）、20s（60％功率）、20 s（80％功率）、30 s（60％功率）、30 s（80％功率）、40 s（60％功率）条件下做大葱的基质干扰试验。试验发现，在前3种微波条件下，随着微波功率和时间的增加，大葱的基质干扰呈逐渐减少趋势，当微波时间和功率增加至30 s（60％功率）以上时，大葱的基质干扰基本可以消除。由此确定，大葱基质干扰基本消除的最低微波要求为30 s（60％功率）。图2给出了未经微波处理及微波处理后的空白大葱样品的色谱图。



2．3．2 微波净化条件对有机磷农药测定的影响

在20.0 g空白大葱样品中添加有机磷农药标准品，使其含量为0．2 mg／kg，放置30 min后使用功率为800 W的微波炉，根据“2．3．1”节确定的消除基质干扰的微波条件，在30 s（60％功率）、30 s（80％功率）、40 s（60％功率）3种微波条件下，对加标样品进行微波净化。实验发现，当微波时问及功率为40 s（60％功率）时，不同的有机磷农药的回收率发生很大的变化，回收率为21.3％～150.3％；当微波时间及功率低于40 s（60％功率）时，有机磷农药的回收率为86.2％～120.0％。表1给出了不同微波条件下有机磷农药回收率的变化。



根据“2．3．1”节和“2． 3． 2”的实验．确定既能消除大葱基质干扰又能保证有机磷农药回收率最佳微波时间及功率为30 s（60％功率）和30 s（80％功率）



2．4 大葱中有机磷农药的加标回收率和精密度

分别在空白大葱中添加0.05，0.2，0.5 mg／kg 3个水平的有机磷农药，每个水平同时做5组平行样，按“1. 2”节分析条件、“1.3”节中的实验步骤进行回收率和精密度测定，结果见表2。 其平均回收率为85.2％～119.6％．相对标准偏差（RSD）为2.l％

农药残留检验方法系列讲座（34）HPLC测粮食中氨基甲酸酯类


高效液相色谱法测定粮食中

氨基甲酸酯类杀虫剂及其代谢物残留量



摘 要：采用高效液相色谱柱后衍生荧光检测法测定了粮食（大米、小麦、玉米、

大豆）中9种氨基甲酸酯类杀虫剂及代谢物残留量。方法的最低检测限为0.01～

0.03 mg／kg，加标平均回收率为70.7％～108.0％，相对标准偏差小于18％。



前 言

氨基甲酸酯类农药是我国当前广泛使用的农药种类之一。该类农药是一类以甲酸酯为前体化合物发展而来的农药，具有分解快，残留期短、低毒高效和选择性强等特点，主要应用于粮食、蔬菜和水果上。随着生活水平和健康意识的提高，人们越来越重视农药残留问题，对氨基甲酸酯类农药残留量的测定也给于了越来越多的关注。目前不同介质蔬菜[1~3]、水果[1,4]、水[5~7]、土壤[8]等中的氨基甲酸酯及其代谢产物的测定己有相关报道，但粮食中氨基甲酸酯类农药残留量测定在国内还未见报道。本方法采用乙腈萃取，固相萃取柱净化，高效液相色谱分离，柱后衍生荧光检测器检测，同时测定了大米、小麦、玉米和大豆 4种粮食中9种氨基甲酸酯类杀虫剂及其代谢产物的残留量。



本分析方法是由农业部环境保护科研监测所的刘潇威、李凌云、吕俊岗、买光熙、李红、王娴、周如意、韩玉、王 璐、李卫键等研究人员共同建立的，现全文介绍如下。



实 验

l 实验部分

1．l 仪器

Agi lent 1100型高效液相色谱仪（美国），配置四元泵，真空脱气机、自动进样器、荧光检测器及色谱工作站。Pickering 5100柱后衍生系统（美国）。N－EVAP－l125G氮吹仪（Organomation Associates，lnc．美国） FW135型粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。HZTZ双层振荡器（哈尔滨市东联电子技术开发有限公司）



1．2 试剂与材料

甲醇为HPLC级，乙腈、二氯甲烷、NaCl为分析纯，柱后衍生用碱液，OPA稀释溶液，邻苯二甲醛（0－phthaladehyde，OPA），巯基乙醇（Thiofluor）（美Ld Pickering公司），水为超纯水。固相萃取氨基柱（6 mL，500 mg）；色谱柱：C18保护柱（4.6 mm ID×4.5 cm）；分析柱，C18（4.6 mm ID×25 cm×5 μm）。涕灭威（aldicarb）、涕火威砜（aldicarb sulfone）、涕灭威亚砜（aldicarb sulfoxide）、克百威（carbofuran）、三羟基克百威（3－hydroxycarbofuran）、速灭威（metolcarb）、异丙威（isoprocarl））、仲丁威（BPMC）、西维因（carbaryl）9种氨基甲酸酯杀虫剂及其代谢物标准品（Chemservice公司）。



1．3 样品制备

取大米、玉米、小麦、大豆各不少于2 kg，随机取500 g，粉碎机粉碎后，过孔径0.833 mm筛，备用。



1．4 样品提取

准确称取l0.0 g过孔径0.833 mm筛的样品于250 mL具塞三角瓶中，加人20mL水，再加人50mL乙腈，在振荡器上振荡30 min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5～7 g NaCl的100 mL具塞量筒中，盖上塞子，剧烈震荡1 min，在室温下静置10min，使乙腈相和水相分层。准确吸取10.00 mL 上层乙腈相溶液，放入150 mL烧杯中，将烧杯放在80℃水浴锅上加热，杯内缓缓通人氮气流，蒸发近干，待净化。



1．5 样品净化

用V（甲醇）：V（二氯甲烷）＝1: 99混合溶液2mL溶解样品，先用此混合溶液4 mL预洗氨基固相萃取柱，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即加人用2 mL甲醇／二氯甲烷溶解的样品溶液，用15 mL离心管收集洗脱液，用上述混合溶液2 mL洗烧杯后过柱，并重复1次。将离心管置于氮吹仪上，水浴温度50℃，氮吹蒸发至近干，用甲醇准确定容至1.0 mL。在混合器上混匀后，用0.2 μm滤膜过滤，供HPLC分析。



1．6 液相色谱测定条件

流动相为甲醇和水，采用梯度洗脱（梯度洗脱程序见表1）；柱温：42℃；柱后衍生条件：试剂1：0.5 mol／L NaOH，流速，0.3 mL／min；试剂2：OPA试剂，流速0.3 mL／min；水解温度：100℃；衍生温度：室温；进样量：20μL；荧光检测器（λex 330 nm，λem 465 nm）。



2 结果与讨论

2．1 分离性能

优化流动相梯度洗脱程序，9种氨基甲酸酯杀虫剂及其代谢物除涕灭威砜及涕灭威亚砜部分分离外，其它农药均得到很好分离（见图l）。


1. 涕灭威亚砜 2. 涕灭威砜 3. 三羟基克百威 4. 涕灭威

5. 速灭威 6. 克百威 7. 西维因 8. 异丙威 9. 仲丁威



2．2 回收率及精密度

对9种氨基甲酸酯杀虫剂及其代谢物分别在大米、小麦、玉米和大豆4种粮食上进行0.05、0.1、0.5 mg／kg 3种浓度水平添加回收实验，每种浓度水平重复3次．得到了很好的结果。测定结果见表2。由表2可以看出，在3种添加水平上，9种氨基甲酸酯杀虫剂及其代谢物的平均回收率都在70.7％～108.0％之间，RSD在18％以下、符合农药多残留检测的回收率RSD要求。



2．3 检出限

按S／N＝3计算、9 种氨基甲酸酯杀虫剂及其代谢物的检出限分别为涕灭威0.01 mg／kg．涕灭威砜0.03 mg／kg，涕灭威亚砜0.03 mg／kg、克百威0.02 mg／kg，三羟基克百威0.02 mg／kg．速灭威0.01 mg／kg，异丙威0.02 mg／kg、仲丁威0.02mg／kg，西维因0.0 l mg／kg。

农药残留检验方法系列讲座（35）-HPLC测苹果汁中多菌灵残留



固相萃取-HPLC测定浓缩苹果汁中的多菌灵残留量



摘 要：报道了固相萃取－高效液相色谱法测定浓缩苹果汁中多菌灵残留量的方法。样品经适量水稀释后，C18固相萃取柱提取净化，用V（甲醇）∶V（二氯甲烷）＝1:1淋洗，HPLC法测定。在添加水平为0.10，0.50，2.0 mg／kg时，多菌灵的回收率在92.6％～108.3％之间；RSD＜3％（n＝6），检出限为0.02 mg／kg，该方法的测定结果满足农药残留量的检测要求。



前 言

多菌灵［carbendazim，N-（2-苯并咪唑基）氨基甲酸甲酯］，又叫本并咪唑44号、棉萎灵等，是一种4广谱内吸性杀菌剂。能防治水稻、棉花、蔬菜、果树等多种作物的多种病害，尤其对子囊菌和半知菌引起的病害有较好的防治效果[1]，但它的残效期比较长，对哺乳动物有一定的毒性[2]，因此农产品中多菌灵残留量的测定越来越受到重视。近年来，文献报道的方法有可见光比色分析及紫外光谱法[3]、气相色谱法[4] 、高效液相色谱法[5-7]等。 本文认为，采用C18固相萃取柱提取和净化样品与高效液相色谱联用是目前测定农产品中多菌灵残留量的最佳方案之一。



本文由孔祥虹2、海 云3和仇农学1（1.陕西师范大学食品工程系；2.陕西出入境检验检疫局；3.西北大学化学系）合作完成，现全文介绍如下：



实 验

1 实验部分

1．l 仪器和试剂

LC－6A 高效液相色谱仪：配有SPD－6AV检测器（日本岛津制造所），N2000色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）：氮吹仪（Oryanomation Associates Inc）；C18固相萃取柱（规格：3 mL，0.5 g，Supelco，Inc）；过滤膜为0.45μm水系膜（陕西奥联科技发展有限公司）。甲醇（色谱纯）；去离子水；醋酸钠和醋酸（均为分析纯）；多菌灵标样（购于农业部环境保护科学研究检测所，纯度≥99．0％）。



1．2 色谱条件

色谱柱： ZORBAX SB－C18／不锈钢柱（5 μm 250m×4．6 mm i.d Agilent公司）；流动相：V（甲醇）:V（水）＝55:45，并用乙酸钠与乙酸调节pH 6．5，流速为0.8 mL／min。进样量：l0μL。柱温：30℃。检测波长：286 nm。



1．3 实验方法

1．3．1 标准溶液配制

准确称取适量多菌灵标准品，用甲醇配制成10 mg／L的标准溶液。分别吸取标准溶液0.50，1.00，5.00，10.00，25.00 mL置于50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得质量浓度为0.1，0.5，1.2，5.0和10 .0mg／L的系列标准溶液。摇匀待用。

1．3．2 样品处理

取20.0 g浓缩苹果汁于50 mL容量瓶中，加入1 mL甲醇，用去离子水定容，充分摇匀后待用。取上述样液5 mL，以2 mL／min的流速过柱，用3 mL二氯甲烷淋洗，真空抽滤后弃去淋洗液，然后再用5 mL V（甲醇）:V（二氯甲烷）＝1:1溶液对保留在柱上的样品进行洗脱，洗脱流速1 mL／min。将洗脱液收集试管中，在40℃下用氮气吹干，用I mL甲醇溶解，过0.45μm微孔滤膜后进行检测。



2 结果与讨论

2．1 SPE柱的选择和洗脱条件的优化

多菌灵是一种两性化合物，在中性和偏碱性水溶液中溶解度低，微溶于丙酮、乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂，能溶于无机酸和乙酸等有机酸[8]。考虑到样品中多菌灵量很低，因此进行分析时选择穿透体积大的固相萃取柱（500 mg／3 mL）以获得在实验条件下对农药有较高的富集因子，实验结果证明多菌灵富集完全。果汁中主要含有色素、有机酸和糖，当采用活性碳吸附色素时，多菌灵也被吸附，测得的回收率为50％左右，因此仅采用C18固相萃取小柱。图1和图2为多菌灵标准溶液的色谱图和经过净化后加标果汁样品的色谱图。从图中看出，果汁样品得到了良好的净化和富集。

样品洗脱时选择二氯甲烷和甲醇二元溶剂，分别用不同体积比的二氯甲烷和甲醇（10∶90、2080、 30∶70、 40∶60、 50∶50、 60∶40、 70∶30、80∶20）洗脱小柱，结果表明用50∶50时，所需洗脱量较少且洗脱后干扰少。实验还表明样品过柱流速、洗脱速率等对提取回收率影响较少。取洗脱剂体积为5 mL，分别用1mL/min和2 mL/min的洗脱速率，回收率均大于95％。选择洗脱速率为2 mL／min，分别以2、3、4、5、6、8 mL洗脱剂体积进行洗脱，结果表明，当洗脱剂体积大于5 mL时，样品的回收率在95％以上。本实验选择洗脱速率为2mL／min，洗脱剂体积为5 mL。




2．2 方法的线性范围和检出限

在1．2节的色谱条件下，对多菌灵分别为0．1、0．5、1、2、5和10 mg／L的系列标准溶液进行色谱分析。准确吸取标准溶液l0μL进样，每一个浓度进样3次。以峰面积（Y，μVs）对多菌灵的质量浓度（ρ，mg／L）进行线性回归，得线性方稆Y＝46874p－744.75，r＝0.9999，通过实验测定，以3倍信噪比计算，本方法多菌灵的检出限为0.02mg／kg，线性范围为0.10～10 mg／L。


2．3 回收率

用上述所建立的方法，对果汁样品及加标果汁样品进行预处理和液相色谱测定。分别得出3种浓度添加水平的回收率和精密度，结果见表-1。可看出，多菌灵加标回收率均在90％～I 10％之间。

农药残留检验方法系列讲座（36）-柱后光化学反应-HPLC-茶叶中农药

柱后光化学反应荧光检测高效液相色谱法测定

茶叶中的五种菊酯类农药残留



摘 要 建立了柱后光化学反应荧光检测高效液相色谱法测定茶叶中菊酯类农药残留的方法。采用Hypersil ODS 色谱柱，以乙腈/ 水为流动相、梯度洗脱进行分离。用自制的光化学反应器作为荧光衍生装置，优化了柱后光化学反应的实验条件，并用于茶叶样品中菊酯类农药残留的测定。方法的检出限为0.012 ～0.048 μg/g （干重）；线性范围0.040 ～8.0 μg/g； 相对标准偏差3.4% ～6.4%（0.1mg /L，n =8）



本文是福建省自然科学基金重点项目（ No. B0220001），由温裕云1 弓振斌1、2 和姚剑敏1 （1厦门大学海洋学系；2厦门大学海洋环境科学教育部重点实验室）等研究人员共同完成，他们通过用自制的光化学反应器作为荧光衍生装置，优化了柱后光化学反应的实验条件，这种克服困难自己动手不是躺在国外仪器上完成分析的精神值得大家学习，现全文介绍如下：



1 引言

茶叶是我国重要出口农产品，为了提高我国茶叶产品在国际上的竞争力，应依据不同国家和地区对茶叶农药残留限量标准［1］的规定，尽快建立和完善茶叶制品中农药残留检测技术和安全卫生保证体系。

拟除虫菊酯类农药残留量测定方法主要有气相色谱法（GC ）和高效液相色谱法（ HPLC）。GC 测定菊酯类农药残留具有分离效果好、快速、灵敏度高的优点［2，3］，但拟除虫菊酯具有热不稳定性，用GC 测定时需要较高的气化温度，且对实际样品的净化过程要求严格；近年来用HPLC 法测定拟除虫菊酯的报道逐渐增多［4～6］，但紫外-可见检测器灵敏度低、选择性差，难以满足实际样品分析的需要；高效液相色谱-质谱（HPLC-MS），设备昂贵，操作复杂，一般实验室无法实现。

光化学荧光法（PCF）是建立在光化学反应基础上的荧光分析技术［7］。它以光子为衍生试剂，实验装置简单、灵活，方法灵敏度和选择性较紫外-可见检测器有较大的改善。近年来PCF 和流动注射分析（FIA）［8-10］、HPLC［5,11-14］等技术相结合，应用于药物分析［9,10］、环境污染物分析［11］、农药残留分析［5,8,14］等领域，已逐渐显示其独特的优点。本实验在前期工作［15,16］的基础上，系统研究了光化学衍生的各种主要影响因素，优化了光化学衍生的实验条件，以光化学衍生荧光检测技术实现了茶叶中菊酯类农药残留的高灵敏检测，建立了简便、可靠、灵敏的菊酯类农药残留检测方法。



2 实验部分

2. 1 仪器与试剂

HP1100 高效液相色谱仪（美国Hewlett-Packard 公司）。系统配置：HP G1312A 二元泵；HP G1315A 二极管阵列检测器（ DAD）；HP G1321A 荧光检测器（ FLD）；Rheodyne 7725i 进样器；20μL 定量环；HP ChemStation 色谱工作站；Hypersil ODS 色谱柱（5 μm，250 mm×4.0 mm i.d. ，Germany）。光化学反应器（自制）如图1 所示。反应器包括紫外衍生光源（15 W 低压汞灯，螺旋形），流路（ PTFE 反应管，美国Zeus Industrial Products 公司），光化学反应的温度控制模块（恒温箱，实验室自制），接口（ PEEK 头），光反射壁（铝箔）。正庚烷、乙腈为色谱纯（ 美国Tedia 公司）。实验用水为超纯水。甲氰菊酯、氯氰菊酯（96. 8% ）标准品购于德国Sigma 公司；氰戊菊酯（99. 9% ）标准品购于RdH 公司；联苯菊酯和氟胺氰菊酯购于农业部环境保护科研监测所。上述农药标准品均用正庚烷配制成一定浓度的标准混合物。






2. 2 实验方法

色谱分离条件是在前期工作［15］的基础上进一步优化确定的。进行色谱分离条件优化时检测器仍然用DAD，待分离条件确定后用自制的光化学荧光衍生装置在DAD 检测器后进行光化学衍生反应，然后用FLD 进行检测，从而进行光化学反应条件的优化。实际样品的测定按文献［15 ］的预处理方法进行，最后以本工作优化后的实验条件进行测定。



3. 结果与讨论

3. 1 流动相及其配比、流速

以前的实验采用乙腈/ 水为流动相［15］，在乙腈: 水= 74:26 且流速为1.2 mL /min 时，5 种菊酯类农药能完全分开，但联苯菊酯的保留时间较长且谱峰较宽。因此，本实验采用了梯度洗脱程序，以缩短联苯菊酯的保留时间并改善其峰形。实验结果表明，以下的梯度洗脱程序能使各组分得到良好的分离且分析时间较短：0～8.7 min，MeCN:H2O =74:26；8.7～11.0 min，MeCN: H2O 从74: 26 变为85: 15；11～20 min， MeCN:H2O =85:15 。流速均为1.0 mL /min 。采用梯度洗脱后荧光检测器基线比二极管阵列检测器基线稳定，并在15 min 内能分析完毕。

流动相组成会影响柱后光化学反应速度、产物以及产物的荧光发射强度。在实验条件下，选定的流动相配比可以得到满意的荧光信号强度。



3. 2 荧光检测器激发、发射波长的选择

5 种菊酯类农药除联苯菊酯外，其它各组分在没有经过紫外光照射时均没有荧光发射；而经紫外光照后，各组分均有较强的荧光（ 如图2 所示）。甲氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、氟胺氰菊酯光化学反应产物的激发光谱曲线均有两个峰值，波长分别为279nm 和221 nm；但各组分在279 nm 时荧光信号的基线较高且不稳定，因而适宜选择221 nm 为激发波长。联苯菊酯光化学反应产物的激发光谱曲线也有两个峰值，波长分别为258 和206 nm，综合考虑其它组分在这两个激发波长下均不能得到最强的荧光信号，且联苯菊酯的产物在221 nm 波长下其荧光信号仍然较强，因此选择λem 为221 nm 。

甲氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、氟胺氰菊酯光化学反应产物的最大发射波长为320 nm，联苯菊酯为340 nm 。为了使甲氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、氟胺氰菊酯有最大的荧光信号，选择λem 为320 nm 。



3. 3 PTFE 管内径的选择

实验中采用了3 种不同内径（分别为0. 46mm 、0. 38mm 和0.30 mm ）的PTFE 管进行实验。对PTFE 管内径的选择要考虑以下因素：

（1）应该与色谱分离系统采用的连接管线内径尽量一致，以减少色谱分离效率的损失；

（2）PTFE 管较小的内径容易使紫外光充分照射管内的流体；

（3）流动相流速相同时，较小的PTFE 管内径使流动相的线速度加快，减少了紫外光照射的时间。实验结果表明，采用内径为0.30 mm 的PTFE 管，色谱分离效率的损失最小，同时使紫外光的照射较充分，获得较强的荧光信号。