农药残留检验方法系列讲座（49）（下）饲料中三聚氰胺检测方法

⑷ 标准溶液的制备
精密称取三聚氰胺标准品0.1000g，置于100mL容量瓶中，用甲醇溶液溶解、稀释至刻度，得到浓度为1000μg／mL的标准储备液：吸取标准储备液10.00mL于100mL容量瓶中．用甲醇溶液定容至刻度．得到浓度为100μg／mL的标准中间液：分别吸取标准中间液5、10、25、50mL，于100mL容量瓶中，用甲醇溶液定容，得到浓度分别为5、10、25、50、100μg／mL的标准工作液。

⑸ 结果计算
计算公式：X=C·V·n／m

式中：
X一试样中三聚氰胺的含量(mg／kg)；
C一标准曲线上查得的试样中三聚氰胺的浓度(μg／mL)；
v一净化后加入的甲醇溶液体积(mL)；
m一试样质量(g)；
n一稀释倍数。
3 三聚氰胺在饲料中的危害
3．1 “宠物毒粮”风波
2007年3月．美国食品药品管理局(FDA)在对连续死亡猫狗的调查中发现．数个知名品牌宠物饲料的主要原料小麦蛋白粉和大米蛋白浓缩物中，都含有化学物质三聚氰胺。FDA要求厂方召回这些饲料的同时，发现涉及的两种原料来自中国。FDA的调查已最终确证，导致宠物死亡的罪魁祸首正是小麦蛋白粉和大米蛋白浓缩物里含有的三聚氰胺。这种物质对人体和动物的危害尚未被完全认知，但已知的是，“如长期和反复接触，该物质可能对肾发生作用”(《国际化学品安全手册》第三卷)，“宠物毒粮”事件引起中美两国政府和民众高度关注。一时间，中国相关产品短期内的出口在多个国家遭禁，美国媒体开始质疑中国食品的安全性。
3．2 致富“捷径”与制度“漏洞”
三聚氰胺是否可以加人食物和饲料，在此次事件前，科学界对此没有专门论证。在中国，三聚氰胺没有进人饲料添加剂名录，但也无法律法规明令禁止。即使在美国，FDA此前也未对此种化学物质有特别的规定，法律的漏洞为唯利是图的商人们留下了空间。中国饲料业近年已趋于饱和，也形成了一些知名品牌，刚起步的小型饲料厂家已难以与品牌厂家竞争。由于小饲料厂一般生产工艺原始且落后，其生产饲料的蛋白质含量一般要比品牌厂家低数个百分点。而每低1个百分点，意味着少卖50～60元／t。这使得小厂基本无利可图。但是，添加三聚氰胺等化学原料可以在检测中提高饲料的蛋白质含量．这一方法很快在业内传开并被不良厂家大肆使用 目前国际上测定饲料蛋白质含量通行的办法叫“凯氏定氮法”，即以含氮的多少乘以一定系数得出蛋白质含量。这套检测办法的问题在于．只要在饲料中添加一些含氮量高的化学物质．就可在检测中造成蛋白质含量达标的假象 而三聚氰胺含氮量达66％左右。

一些不法厂商添加三聚氰胺拉高饲料含氮量后，还可以在饲料中加人低价的淀粉等。这样，他们的饲料不仅蛋白质含量达标，相比品牌厂家反而具备了价优势，可以低价占领市场。由于欧美和东南亚国家的宠物饲料市场比国内发达．且价格一般高于国内，因此这些劣质饲料多数销往国外。

中国出口的产品分为法检产品与非法检产品。那些关系到人的健康安全、卫生环保之类的产品被列人到强制检验范围，即法检范围；不涉及到这方面的产品，就列人抽查范围。照此解释，上述企业产品出口时，即使标明为宠物饲料，也为“非法检范围”，仅是抽查而已。宠物饲料只有国家强制要求或出口国家有相关规定的话，才需要检验。正是在这样的监管政策下，个别不法企业在饲料中大量添加三聚氰胺，并依靠低廉的价格获得订单．产品顺利出口在目前的饲料检测中，除了对瘦肉精、苏丹红等少数违禁添加剂会进行检测，像三聚氰胺之类的绝大部分化工原料过去都未被列人检测范围．其原因是化工原料种类太多，不可能都列入检测名录。况且，瘦肉精、苏丹红等之所以要被检测．也是发现相当部分养殖户违规使用后才列人的。实际上，企业从利益角度出发，任意添加各种添加物的行为十分普遍。添加物的选择也五花八门，种类繁多，时时更新换代。相比之下，目前无论是在标准制定还是产品检测监管上，都漏洞重重。

美国法律规定，在人类食品和绝大多数宠物食品中添加物质。生产者必须向FDA做出正式申请，并提供大量数据和检测结果来证明食用它的安全性。同时。政府研究部门也有责任通过大量检测来证明这种物质不会对身体造成伤害，并确定可使用的剂量和程度。而中国目前还没有制订出类似的规定。能使饲料中蛋白质虚高的化学物质不止三聚氢胺一种．像这种跟着突发事件“亡羊补牢”式的法规建设，只能被不法厂商牵着鼻子走。

可喜的是，此次事件发生后，中国政府采取了一系列措施阻止此类事件再次发生。农业部发布贯彻实施《饲料生产企业审查办法》的通知，规定要“及时处理生产条件发生重大变化、存在安全卫生隐患等问题的企业．坚决注销不具备生产条件企业的《饲料生产企业审查合格证》，依法查处违规企业”。国家质检总局也采取紧急措施，从173家植物源性蛋白出口企业抽取399个样品进行检测；开展全国质量监督专项抽查，抽查包括奶粉、香肠、方便面等l2类800批次食品。两项检测均未检出三聚氰胺。随后，政府将三聚氰胺列人出口法检范围
4 结束语
三聚氰胺虽是一种用途广泛的有机化工原料，但在饲料中添加．不仅对养殖业具有不良影响，还对人类健康存在着严重威胁。开发无污染、无残留的绿色饲料，提供无污染、无残留的安全动物性食品．成为当前畜牧工作者迫在眉睫的任务。我们应该大力推进饲料科技进步，制定和完善饲料行业政策法规，打击搀杂使假、违规添加违禁物行为．全国上下齐心协力，共同确保饲料安全，使中国饲料工业在新世纪里健康发展!

农药残留检验方法系列讲座（50）加速溶剂萃取测定食品中有机磷农药

利用加速溶剂萃取仪测定食品中有机磷农药残留方法探讨

摘 要： 本文讨论了应用ASE-300 加速溶剂萃取仪提取食品中有机磷农药残留量的方法。经实验，应用加速溶剂萃取仪提取粮食、茶叶、蔬菜、水果等样品，利用气相色谱分析技术，检测了其中敌百虫、甲胺磷、敌敌畏、甲拌磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、马拉硫磷、对硫磷等八个组分的有机磷农药残留。提取效率在75-111%之间，精确度、准确度均达到了满意效果。本法快速、简便，样品提取效率高，使用有机溶剂少，降低了检验人员的劳动强度，减少了有机试剂对环境和工作人员的污染，



本文由北京市东城区疾病预防控制中心李冬梅同志撰写，使用加速溶剂萃取仪对多种食物进行前处理，现全文介绍如下。



前 言

粮食、茶叶、蔬菜、水果是人类膳食中不可缺少的食品，近年来食品污染问题日趋严重，其中最严重的当属农药污染。由于有机氯农药在我国已被明令禁止，有机磷农药在我国被广泛使用，其使用量占我国农药总量的70%以上。为防止病虫害的发生，保证高额的产值，农民在农作物的生长期乃至收获、采摘之前，都在大量的使用有机磷农药，至使食品在上市后仍存在一定量的农药残留，给消费者带来伤害。因此，建立高效快捷检测食品中有机磷农药残留的方法迫在眉睫。

当今分析领域，随着气相色谱等分析仪器在基层化验室的普及，分析方法的精密度大幅提高，但复杂样品的前处理，往往滞后于分析方法的发展。有些样品在预处理中存在提取不完全、损失很大的弊端，成为现代分析的薄弱环节。目前测定有机磷农药残留量样品的前处理多为直接有机溶剂浸提，方法操作复杂、费时，提取不完全，并使用大量有毒有害有机试剂，有碍人体健康，并造成环境污染。在以往的数年中，人们做了多种尝试以期找到一种高效、快捷的方法以取代传统萃取方法，如自动索氏萃取、超声萃取和超临界萃取等，虽然以上各法较经典的萃取法相比已有了很大的进步，但仍然存在着有机溶剂用量偏多，萃取时间较长，萃取效率还不够高的缺点。全新的加速溶剂萃取的方法（Accelerated Solvent Extraction 简称ASE）,是一种在提高温度和压力的条件下，用有机溶剂萃取的自动化方法。与前几种提取方法相比，其突出的优点是有机溶剂用量少、快速、损失少、萃取完全。本文应用这一新兴的样品前处理技术-加速溶剂萃取，以气相色谱法定性、定量测定食品中有机磷农药残留，快速简便、成本低廉，大大地减少了有机试剂的使用，更加环保，也保护了实验人员的身体健康。



实 验

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂：

美国DIONEX 公司ASE-300 加速溶剂萃取仪，日本岛津GC-17A 型气相色谱仪，配有火焰光度检测器（FPD），CLASS-GC10 气相色谱工作站、KD 浓缩仪、

有机磷农药标准：由国家标准物质研究中心购买 二氯甲烷 、丙酮、硅胶小柱



1.2.实验方法：

1.2.1 样品处理：

萃取：称取一定量的粉碎的样品装入不锈钢萃取池中，拧紧池盖，防入圆盘式传送装置，该装置自动将萃取池送入加热炉腔。萃取池在炉腔内在一定的压力下自动密封，萃取池中开始注入溶剂，加热加压，达到设定温度后，萃取池在炉腔中按用户设定的时间恒定温度和压力，萃取之后分析物及溶剂自动经过过滤进入收集瓶，萃取池中被注入新鲜的溶剂并用氮气 吹扫，完成后萃取池返回圆盘传送装置，下一个样品开始被萃取。

净化：样品收集瓶加入一定量的活性炭脱色，过滤，经过硅胶小柱后，用KD浓缩仪浓缩，用二氯甲烷定溶至1mL，供气相色谱仪分析。

1.2.2.萃取条件：

温度：100℃ 压力：1500psi 时间：5min

溶剂：A 二氯甲烷50% B 丙酮 50%

1.2.3 色谱分析：色谱条件：

色谱柱：DIKMA DM-1 毛细柱 0.25mm×30m×0.25μm

柱 温： 起始温度120℃保持3min，以38℃/min 升至130℃保持5.6min，以38℃/min 升至200℃保持15min

检测器温度：280℃

进样口温度：280℃

进样方式：分流进样，分流比：1：10

柱流量：1mL/min

载 气：N2 纯度 >99.99%

进样量：1.0μL

采用火焰光度检测器（FPD），以保留时间定性，峰高定量。




2 结果与讨论：

2.1 溶剂的选择：

国际上经常用乙腈做有机磷农药残留的提取溶剂，但由于其毒性大，价格昂贵，我们考虑用二氯甲烷和丙酮的混合液，达到了满意的提取率；



2.2 萃取条件的选择：

2.2.1 提高温度使溶剂溶解待测物的容量增加，降低溶剂的粘度，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，增加了溶剂进入样品基体的扩散，从而大大地降低了溶剂的使用量。经试验，我们发现在温度：100℃ 可达到较高的提取效率；

2.2.2 液体的沸点一般随压力的升高而提高。本法增加压力，提高了溶剂的沸点，使溶剂在较高的温度下仍保持液态，加大了对溶质的溶解能力。同时，在加压状态下，可将溶剂迅速加到萃取池和收集瓶中，提高工作效率。经试验，我们确定萃取压力：1500psi；



2.3 提取净化：

由于食品样品种类繁多，基质复杂，我们针对不同的样品采用不同的提取净化方法：

2.3.1 粮食：样品经粉碎后，由于样品颗粒较小，萃取池要加双层滤膜提取样品，提取液用无水硫酸钠脱水，活性炭脱色，经硅胶柱净化；

2.3.2 茶叶：此类干性样品经粉碎后混均取样。提取液用活性炭脱色，经硅胶柱净化；

2.3.3 蔬菜、水果：由于此类样品水分比较大，取样时，要将打碎的样品与硅藻土充分研磨、混均，提取液用无水硫酸钠脱水，活性炭脱色，经硅胶柱净化。硅藻土的加入量视样品的水分大小而定，要将样品中的水分充分吸收，样品沾在倒扣的乳钵上刚好不落下为宜。



2.4 提取效率实验：

取不同的样品混均后加入已知浓度的标准溶液，提取、净化后用气相色谱分析。提取效率在75-111%。(n=33)



3 结论：

本文采用当今世界流行的加速溶剂萃取的样品前处理技术提取并检测样品中有机磷农药共计99 件，其中粮食32 件，茶叶8 件，蔬菜35 件，水果24 件。建立了以二氯甲烷、丙酮做溶剂，提取食品样品的条件，总结了不同样品的提取、净化方法，用气相色谱仪分析。实验表明：用本法提取粮食、茶叶、蔬菜、水果等样品中敌百虫、甲胺磷、敌敌畏、甲拌磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、马拉硫磷、对硫磷等八个组分的有机磷农药残留量，提取效率在75-111%之间，具有良好的精确度与准确度。本法快速、简便，样品提取完全，使用有机溶剂少，简化净化步骤， 大大地降低了检验人员的劳动强度，减少了有机试剂对环境和人员的污染，是一种值得推广的萃取方法。

农药残留检验方法系列讲座（51）HPLC强阳离子交换快速测定原料乳中三聚氰胺

高效液相色谱强阳离子交换模式

快速测定原料乳中三聚氰胺



摘 要 本文建立了以离子交换模式分离检测三聚氰胺的新方法。采用ZORBAX 300SCX强阳离子交换色谱柱，以50mmol/L甲酸铵溶液（pH=3.0）-乙腈(15:85)为流动相，检测波长240nm，流速1mL/min，柱温30℃。本方法简单快捷、选择性好，5分钟内即可将简单处理(未经SPE处理的)样品中的三聚氰胺和基质干扰很好分离。同时，因无需在流动相中添加离子对试剂，该方法条件也可用于三聚氰胺LC/MS确认。



本文由安捷伦科技有限公司的博士研究人员实验并撰写的（具体人名未标上），是一篇值得参考的简单快速的强阳离子交换模式液相色谱分析方法，现全文介绍如下。



前 言

三聚氰胺（melamine）是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，俗称密胺，IUPAC命名1,3,5-

三氨基-2,4,6-三嗪，化学式为C3H6N6，是一种主要用于生产塑料、胶水和阻燃剂的化工原料 [2]。它为白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水 (3.1g/L常温)，可溶于甲醇、乙酸等溶剂，具毒性，不可用於食品加工或食品添加。由于三聚氰胺含氮量高，不法分子将其添加到饲料、

奶粉等食品中提高含氮量，冒充高蛋白食品，从而大幅度降低成本。近期曝光的三鹿奶粉事

件再一次引起了社会的极大反响，开发简单而可靠的三聚氰胺检测方法即成为安全食品又是一重要任务。

检测三聚氰胺的方法主要包括LC、LC/MS 和GC/MS 方法。在液相色谱中，由于三聚

氰胺极性强，在反相柱上难以保留，FDA 方法采用反相离子对模式来加强保留，但离子对

模式对色谱柱的损伤大、平衡缓慢，且不适宜液质联用。本文采用ZORBAX SCX 强阳离子交换谱柱分离和检测三聚氰胺样品，流动相中不需加离子对试剂，获得了理想的保留和分离。




实 验

1.实验及方法

1.1仪器

本实验使用安捷伦1100 高效液相色谱系统（配置在线真空脱气机、四元泵、标准自动

进样器、柱温箱、紫外检测器及ChemStation 化学工作站），电子天平为METTLER TOLEDO 公司的AL104，pH 计为METTLER TOLEDO公司的DELTA 320

1.2 试剂与标样

乙腈为迪马公司HPLC级乙腈，超纯水为经Milli-Q系统净化处理过的纯净水。

三聚氰胺标准贮备液：浓度1mg/mL，溶剂为乙腈/水（1：1）

标准工作液：逐级稀释三聚氰胺标准贮备液，以乙腈/水（1：1）定容，制成浓度分别

为0.5ug/mL，1.0ug/mL，5.0ug/mL，10ug/mL，50ug/mL，100ug/mL 的标准工作液

1.3 样品制备

准确称取约5g 样品，加入50mL 乙腈/水（1:1），涡旋混合，用0.45μm的滤膜过滤，

备用。

1.4色谱条件

色谱柱为ZORBAX 300SCX 4.6×150mm，5um；检测波长为240nm；流速：1mL/min；柱温30℃；进样量为10μL。流动相配制：首先配制50mmol/L 甲酸铵溶液，用甲酸调节pH值至pH=3.0；而后按15：85 的比例分别量取一定体积的甲酸铵缓冲液和乙腈，混合均匀后使用。



2．结果与讨论

2.1 保留与峰形

ZORBAX 300SCX 为硅胶基质苯磺酸键合硅胶填料，除了具备阳离子交换能力，键合相中的苯环结构也提供一定反相作用机理，本方法开发过程中主要从水相的缓冲盐浓度、pH、水相/有机相比例等方面进行了精心优化，获得了良好的保留和柱效。图2 为10ug/mL 三聚氰胺标样色谱图，计算得到USP拖尾因子Tf =0.97，理论塔板数为14,119。



2.2 精密度

流动相平衡色谱柱约30 分钟保留时间即可稳定，考察10ug/mL 标样连续进样6 次的结果，保留时间和峰面积的相对标准偏差（RSD）分别为0.03%和0.98%。USP Tf=0.97

N=14,119



2.3 线性范围与检出限

以0.5ug/mL, 1.0ug/mL, 5.0ug/mL, 10ug/mL, 50ug/mL, 100ug/mL 标准工作液绘制标准曲线，得到线性回归方程y = 15.054x，相关系数R2 = 0.9998（图3）。计算检出限约为0.05ug/mL，实际分析0.05ug/mL 标样，信噪比3.9（图4）。



2.4 实际样品分析

离子交换模式对可离子化目标化合物具有很好的选择性，本方法考察了未经SPE 净化处理的奶粉样品（图5）。如图可见，样品中的基质干扰物在SCX 色谱柱上很少保留，多在前面流出，且三聚氰胺与其附近的一主要干扰峰的分离度很好，非常有利于三聚氰胺准确定量。



3 结论

本方法采用ZORBAX 300SCX 强阳离子交换色谱柱分析三聚氰胺，在不含离子对试剂的简单流动相下能够很好地控制三聚氰胺的保留；且该方法对三聚氰胺的选择性好，实际样品即使不经过SPE 净化，也可获得三聚氰胺与基质干扰物的良好分离，为奶制品中的三聚氰胺检测提供了一个的快速、简便而可靠的液相新方法。

农药残留检验方法系列讲座(52)GC测定嘧菌酯在黄瓜和土壤中的残留

气相色谱法测定嘧菌酯在黄瓜和土壤中的残留方法研究





摘 要： 报道了嘧菌酯在黄瓜及土壤中的残留分析方法。样品用丙酮提取，二氯甲烷萃取，硅胶和酸洗活性碳混合柱净化，用二氯甲烷:乙酸乙酯混合液（7:3，V/V）淋洗，GC—FTD检测嘧菌酯的残留量。最小检出量为6.25×10-11g，最小检出浓度：黄瓜为0.001 25 mg·kg-1 ,土壤为0.002 83mg·kg-1。当添加浓度在0.01～1 mg·kg-1时，其回收率：黄瓜在89.26%～95.69%之间，土壤在86.65%～101.68%之间。



本文由尹丰平1 ，卢植新2 ，林明珍 2（1 广西大学农学院；2 广西农业科学院应用农药研究中心）合作完成一种由英国先正达有限公司开发和生产的杀菌剂嘧菌酯的分析方法，现全文介绍如下：



前 言

嘧菌酯（azoxystrobin）是由英国先正达有限公司开发和生产的一种杀菌剂，英文通用名：azoxystrobin商品名称：阿米西达，化学名称为：（E）-｛2-[6-（2-氰基苯氧基）嘧啶-4-基氧]苯基｝-3-甲氧基丙烯酸甲酯，分子式为：C22H17N3O5。对四大类致病真菌：子囊菌、担子菌、半知菌和卵菌纲中的大部分病原菌均有效，对环境及非靶标生物友好，非常适合在有害生物综合治理（IPM）项目中整合运用[1]。该药2001年引入我国后尚未见有残留研究报道。因此，研究其残留分析方法，对进一步探索该化合物在食品和环境中的残留及其消解行为具有重要意义[2]。



实 验

1 实验部分

1.1 仪器、试剂和标准样品

1.1.1 仪器及设备

GC色谱仪带FTD检测器(GC-17A)、N2000色谱工作站、电子天平、组织捣碎机、振荡器、旋转蒸发器、玻璃层析柱（内径8mm×18cm）、K.D浓缩器、分液漏斗、广口瓶等实验室用具。

1.1.2 试剂

丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、无水硫酸钠（430℃下烘5h，置于干燥器内备用），均为分析纯，。硅胶（130℃下烘5h，5%蒸馏水脱活,置于干燥器内备用）、酸洗活性碳、助滤剂cilite545等。

1.1. 3 标准样品

嘧菌酯标准品（纯度99.7%），由英国先正达有限公司提供。

1.2 气相色谱条件 色谱柱：RTX -200 15m×0.32mm×0.5μm.。检测器：FTD。柱温：280℃；进样口温度：300℃ ；检测器温度：300℃；气体流量氮气：15mL/min；氢气：4mL/min;空气：180mL/min，嘧菌酯保留时间：约8.39min；进样方式：分流进样，分流比：8:1

1.3 定量及计算方法 外标法定量，残留量计算方法：




1. 4 实验内容与方法

1.4.1 标准溶液配制

准确称0.002 5g（精确到0.000 1g）的嘧菌酯标准品，用50mL丙酮配制成5×10-5g/mL母液，再根据需要配制成不同浓度的标准溶液。

1.4.2 标准曲线制作

分别用嘧菌酯母液配成6个不同浓度的嘧菌酯标准溶液，在上述条件下进样检测，每个浓度重复3次，得到峰高的平均值。以进样量（ng）为横坐标，峰高电压响应值（μv）为纵坐标作标准曲线（图1），嘧菌酯进样量在0.062 5～6.25ng之间与响应峰高值有良好的线性关系，直线回归式为：Y=742.13X+37.269，相关系数为 0.999 7，其中Y为峰高电压响应值（μv），X为进样量(ng)。



1.4.3 溶剂系统选择

经过反复实验发现，用丙酮提取能达到很好的提取效果，乙腈也可作为提取剂，但是其毒性大且价格比丙酮高。二氯甲烷液液分配萃取，二氯甲烷：乙酸乙酯混合液（7:3 v/v）淋洗，最终用丙酮定容。

1.4.4 样品提取

① 黄瓜中提取方法

称50g（精确到0.1g）经捣碎的黄瓜于广口瓶中，加40mL丙酮，浸泡过夜，振荡提取1h。经布氏漏斗抽滤，滤渣用30mL丙酮分3次洗涤，收集全部滤液于500mL的分液漏斗中，用60、30、30mL二氯甲烷进行液液分配萃取，收集有机相，加入适量的无水硫酸钠脱水，再过无水硫酸钠漏斗于旋转蒸发器内，在45℃水浴中减压浓缩至2～3mL，用二氯甲烷多次洗涤蒸发器，洗液合并于三角瓶中，待过层析柱净化。

② 土壤中提取方法

称取过40目筛风干土壤样30g(精确到0.1g)于广口瓶中，加40mL丙酮，浸泡过夜，振荡提取1h，经布氏漏斗过滤，滤渣用30mL丙酮分3次淋洗，合并滤液，转入旋转蒸发器内，在45℃水浴中减压浓缩至2～3mL ,用丙酮多次洗涤旋转蒸发器，洗液合并于三角瓶中，待过层析柱净化。

③ 样品柱净化

层析柱：内径0.8cm，长18cm，从上至下依次装填 2cm厚的无水硫酸钠，硅胶+碳粉+助滤剂（2:1:1.5）3.5克混合吸附剂，2cm厚的无水硫酸钠，用30mL二氯甲烷预淋洗柱子，弃掉。将样品转入层析柱中，用30、20、20mL二氯甲烷：乙酸乙酯混合液洗脱（7:3V/V），收集全部洗脱液，在KD浓缩器中45℃水浴中减压浓缩至干，用丙酮定容至1mL，待测。



2 实验结果

2.1 方法灵敏度 采用外标法定量。在上述最佳条件下，嘧菌酯最小检出量为6.25×10-11g。最低检出浓度为：黄瓜为0.001 25mg/kg，土壤为0.028 3mg/kg。

2.2 方法准确度 分别在黄瓜、土壤中添加嘧菌酯1、0.1、0.01mg·kg-13个浓度，设空白对照，各3个重复，按上述方法提取、净化，嘧菌酯的添加回收率（表2）。





图1 A 嘧菌酯标样色谱图 B 黄瓜对照色谱图 C 黄瓜添加色谱图 D土壤对照色谱图 E土壤添加色谱图



3 结果讨论

在上述条件下，嘧菌酯的保留时间约为8.39min，峰形对称，没有干扰峰，线性范围宽，方法的灵敏度、精密度和准确性好，方法回收率高，均符合农药残留分析的要求，具有简便、快速、成本低和可靠等优点。



参考文献

[1] 刘长令，关爱莹，张明星. 广谱高效杀菌剂嘧菌酯. 世界农药，2002，24（1）：46～49

[2] 樊德方. 农药残留分析与检测.上海：上海科学技术出版社，1986.9

农药残留检验方法系列讲座（53）gc-MS分析水果蔬菜中多种菊酯残留


gc-NCI-MS分析水果蔬菜中多种

拟除虫菊酯农药残留



摘 要：用气相色谱一负化学离子化质谱法(gc—NCI—MS)同时分析了水果蔬菜中7种拟除虫菊酯农药残留．试样用正己烷和丙酮混合提取剂提取与Florisil硅藻土层析柱净化后，以加δ-六六六为内标物．采用gc—NCI—MS的选择离子监测方式(SIM)对7种农药残留进行定性与定量分析．结果表明．此方法快速、简便、灵敏度高和选择性好；7种拟除虫菊酯农药残留的检测限为0．05～1.00ug·kg-1 ．平均回收率为74.6% ～109 %，相对标准偏差为9.9 %～30% ．



本文由厦门大学化学化工学院化学系．现代分析科学教育部重点实验室的林竹光，刘 勇，金 珍，谭 君，范玉兰，陈渊川等研究人员共同完成，现全文介绍如下：



前 言

拟除虫菊酯农药具有广谱、高效、低毒和低残留等特点，被广泛地应用于农业、林业与家居生活等领域的害虫防治，成为使用范围最广的农药品种之一．拟除虫菊酯农药的残留问题已经引起广泛重视，国内外学者研究了各种试样中拟除虫菊酯农药残留的分析方法[1~3 ]，已经将气相色谱一负化学离子化质谱法(gc-NCI—MS)技术应用于多氯联苯、卤代烃、有机氯和有机磷等农药目标物的分析[4~6 ]，证明了在分析电负性目标物方面，gc—NCI-MS是比gc—ECD和gcEl-MS更有优势的分析方法．Yasin等将gc-NCI—MS应用于环境试样中拟除虫菊酯农药残留的分析，建立了灵敏、高效和可靠的分析方法[7,8 ]．国内在gc—NCI—MS方面的研究开展较迟，在拟除虫菊酯农药残留分析方面的研究报道较少．

本文将gc—NCI—MS应用于梨、苹果、西红柿和芹菜等水果蔬菜中7种拟除虫菊酯农药残留的分析，优化了各种仪器参数和实验条件，考察了方法的线性范围、检测限、回收率及相对标准偏差等．



1 实验部分

1．1 试剂与药品

溶剂：丙酮、正己烷、乙酸乙酯，均为农残级试剂(美国Tedia公司)．

农药标准物质：联苯菊酯、甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯和内标物δ-δ-六六六 (中国农业部环境保护科研检测所)．

无水硫酸钠：分析纯 (中国医药集团上海化学试剂分公司)，450℃ 马弗炉中烘烤4 h，然后储存于干燥器中．硅镁型吸附剂 (Florisil硅藻土)：分析纯 (中国医药集团上海化学试剂分公司)，100～200目，650℃ 马弗炉中烘烤4 h，使用前再于140℃烘箱中烘烤2 h以上，加5% 超纯水去活，保存于密闭容器内．

其它所用玻璃器皿均经过铬酸洗液浸泡、丙酮洗涤、400℃ 马弗炉中灼烧等处理过程．

标准溶液配制：用正己烷将各农药标准物质溶液稀释成10.0 μg·mL-1 的储备液；再根据分析需要，用正己烷配制成含有100 ng·mL-1 δ-δ-六六六内标物的系列浓度混合标准使用溶液．

1．2 仪器与设备

Shimadzu gc MS-QP 2010气相色谱一质谱联用仪 (日本岛津公司)，配备El、PCI、NCI与DI；PHILIPS HR 7633食品加工机 (广东珠海飞利浦公司)；KS型康氏振荡器 (广东深圳国华仪器公司)；KQ 3200E超声波清洗器 (江苏昆山市超声仪器有限公司)；DK一S22型电热恒温水浴锅 (上海精宏实验设备有限公司)．

1．3 分析步骤

1．3．1 前处理过程

1) 提取

称取10．0 g经食品加工机搅碎的试样于100 mL具塞锥形瓶中，加入2O mL V (正己烷)：V(丙酮) =1：1混合提取剂，置于超声波清洗器内提取20min，转移出上层有机提取液于50 mL离心管中；残渣再分别用10 mL混合提取剂超声提取两次，合并3次提取液，加适量无水硫酸钠除水后，置于40℃恒温水浴中，氮吹浓缩至5 mL．

2) 净化

在20 cm (长)×1．5 cm (内径)的玻璃层析柱内填人3．5g Florisil硅藻土，在Florisil硅藻土的上下方各填充1 cm高度的无水硫酸钠；先用10 mL正己烷预淋洗层析柱，再将浓缩的提取液转移至层析柱内，然后用20 mL V (正己烷)：V (乙酸乙酯) = 95：5混合洗脱剂洗脱；洗脱结束后，把洗脱液置于40℃恒温水浴中氮吹浓缩近干，然后加入1.00 mL 100 ng·min-1δ-六六六内标溶液溶解于带刻度的小测试瓶中，最终氮吹定容至1.00 mL，供下一步仪器分析．

1．3．2 gc—NCI—MS分析条件

色谱柱：DB-5MS低流失毛细管色谱柱 (30 m×0.25 mm × 0.25 ttm)；载气：高纯He (纯度>99.999％)；柱头压：61.8 kPa；柱流量控制模式：恒线速度36．8 cm ·s-1；进样体积：1.00 L (不分流进样)；进样口温度：260℃ ；接口温度：250℃ ；色谱柱升温程序：初温90℃ ，以25℃·min-1 升至200℃，再以5℃·min-1 升至280℃ ，保留5 min，最后以20℃·min-1升至290℃ ，保留10 min．

NCI源反应气：甲烷 (纯度>99.95 )；反应气输出压力：3.0 kg·cm-1；离子源真空度：3.00×10-3 Pa；离子化电压：7O V；灯丝电流：60 μA；检测器电压：1．00 kV；离子源温度：200℃ ；溶剂切除时间：4．5 min；质谱扫描方式：全扫描 (Full Scan)，时间间隔0.4 s (定性分析)；选择离子监测，时间间隔0．2 S (定量分析)；定量方法：内标法(以峰面积计算)．



2 结果与讨论

gc—NCI—MS分析方法的关键是NCI—MS技术．NCI—MS特别适合于分析电负性目标物，而拟除虫菊酯农药的分子结构 (见表1)大都含有-F、-C1、-Br或-COO-等强电负性基团．全扫描质谱表明，NCI—MS方式下拟除虫菊酯农药都有很强的响应信号．在通常情况下，影响NCI—MS离子化效率和稳定性的因素比较多，需要考虑到特征离子、反应气和离子源等各种因素对分析结果产生的影响，因此有必要对各项参数进行优化，以达到最佳的灵敏度和重现性．

农药残留检验方法系列讲座（53）（下）GC-MS分析水果蔬菜中多种菊酯残留

2．1 特征离子的选择

GC—NCI—MS SIM 的定量分析中，分析离子的选定主要从降低干扰与提高灵敏度两方面考虑，即选定的分析离子既要反映出目标物的特征而其它共存物质并不具备，又要求该离子的相对丰度较高．通常情况下，NCI—MS的离子模式比El—MS和PCI—MS更加简洁，特征离子更加明显．从图l中三氟氯氰菊酯 (Mw=449) 3种离子化方式的质谱图可以看出，NCI—MS只由少数特征的阴离子组成，所以能够准确地选择需要分析的阴离子．

表l列出了各种拟除虫菊酯农药NCI—MS SIM方式下的保留时间、分组时间设定、特征离子及相对丰度．实验表明，所选定的这些特征离子都没有受到试样基体的干扰．

2．2 离子源温度和反应气压力的优化

已开展的研究指出，反应气种类、反应气组成、离子源气压、离子源温度、灯丝电压以及灯丝电流等都是影响NCI—MS分析结果的重要参数 ．本文主要考察了离子源气压和离子源温度两个参数．

离子源气压对NCI—MS分析灵敏度的影响非常喜夏明显，当离子源气压太低时，产生的阴离子碎片丰度很小，目标物信号弱；当离子源气压增高时，产生的阴离子碎片的丰度也会增大，但在目标物信号增强的同时，背景噪声也急剧升高，反而降低了灵敏度．本文分别通过反应气输出压力和质谱仪真空度的调节来反映离子源气压；实验表明，当反应气气瓶输出压力为3．5 kg·cm-2，质谱仪真空度显示值为3.00×l0-3 Pa时，NCI—MS灵敏度最高．离子源温度对NCI—MS分析灵敏度的影响趋势与离子源气压相似，离子源温度在l90～230℃ 时，NCI—MS的灵敏度达到最高，而200℃为离子源常用温度，所以确定离子源温度为200℃．

2．3 线性回归方程、相关系数与检测限

分别取1.00μL 5种不同浓度 (相当于被测试样中含2.5O～100.0 μg·kg-1 浓度水平) 的拟除虫菊酯农药混合标准溶液进样，采集GC—NCI—MS SIM 色谱图，以图中目标物与内标物的峰面积比值对目标物与内标物的浓度比值作线性回归分析，7种拟除虫菊酯农药的线性回归方程和相关系数见表2．



方法的检测限是按取样量10．0 g、定容体积1．0mL、进样体积1．0μL和S／N≥3即目标物峰信号大于等于方法噪声信号的三倍计算，其中方法噪声由仪器噪声和空白试样的基体噪声组成．在NCI—MS方式下，空白试样的基体干扰很小，基体噪声降至仪器噪声的同一水平．图2比较了 (a )拟除虫菊酯农药混合标准溶液和 (b) 加入拟除虫菊酯农药混合标准溶液的梨试样在相同条件下的GC-NCI—MS SIM 色谱图，图2 (b)不但干扰峰非常少，而且噪声几乎与图2 (a)处于同一水平，所以采用标准目标物的检测限即可代替试样中的目标物的检测限，这是GC—ECD 和GC—EI—MS (SIM) 都无法达到的．因此在NCI—MS SIM 方式下，不但可以简化试样的前处理过程，而且试样基体对检测限的影响也很小，7种拟除虫菊酯农药的检测限见表2 ．



2．4 回收率、精密度和试样测定结果

选取梨与西红柿试样来考查分析方法的回收率与精密度．在10．0 g梨和西红柿空白试样 (所有目标物都小于检测限) 中分别添加7种农药混合标准溶液，充分混匀后，按照1．3的分析步骤重复测定10次 (n=10)，计算得出分析方法的平均回收率为74．6% ～109% ，相对标准偏差为9．9% ～30%，均符合痕量农药残留的分析要求．

在市场上随机购买了梨、苹果、西红柿和芹菜4种水果蔬菜试样，按上述分析方法分析出芹菜中甲氰菊酯残留量为33．0μg·kg_-1，梨、西红柿和芹菜中的氯氰菊酯残留量分别为9．30μg·kg-1、93．4 μg·kg-1和0．43 μg·kg_-1，西红柿和芹菜中氰戊菊酯残留量分别为4．35 μg·kg -1和0．61μ g·kg_-1，都没有超出相关标准规定，其它拟除虫菊酯农药均未检出．




3 结 论

本文将GC—NCI—MS SIM 应用于水果蔬菜中7种拟除虫菊酯农药残留的分析，考察了分析方法的线性回归方程、线性范围、检测限、回收率和相对标准偏差．分析结果表明，此方法简便、快速、灵敏度高、干扰少、选择性好，在定性和定量分析方面都能够满足拟除虫菊酯农药残留的分析要求，是农药残留分析领域非常有发展前景的分析方法．

农药残留检验方法系列讲座（54）微波碱解消除土壤中有机氯农药干扰

微波碱解法消除土壤样品多氯联苯

测定中有机氯农药的干扰

摘 要

有机氯农药 (Ops) 严重干扰多氯联苯(PCBs)的测定，本文采用微波加热技术将Ops碱解，在优化的实验条件下能完全消除六六六(HCH)、双对氯苯基三氯乙烷(DDT)、二氯二苯二氯乙烷(DDD)的干扰，二氯二苯二氯乙烯(DDE)、艾试剂(Aldrin)、狄试剂(Dieldrin)也有一定数量的减少，狄试剂经浓硫酸处理后其干扰完全消除。通过对合成土壤样品的处理，表明该法能有效地碱解Ops，消除其对测定PCBs的干扰；并能在碱解Ops的同时萃取PCBs，PCBs回收率为84.1%，相对标准偏差为2.7%。本方法快速、高效，减少了有机溶剂的使用量。



本文由中山大学化学系的何小青、李攻科、熊国华、张展霞老师们发表在《分析化学》第28卷的研究报告中，是广东省自然科学基金博士启动基金、教育部留学回国人员科研启动基金资助项目，文中含有较多的操作经验。现全文介绍如下：



1 前 言

多氯联苯(PCBs)具有生物积累性和三致作用，严重危害生态环境和人体健康，是优先控制污染物[1]。侧定土壤中PCBs。的主要困难是将其与干扰测定的有机氯农药(Ops)分开，目前国内外消除Ops，对PCBs分析干扰的方法主要采用柱分离[2]，但此方法操作繁琐、耗时、消耗溶剂量大；离心碱解也是一种消除Ops干扰的方法，但需将PCBs及Ops提取出来后再进行碱解。本文采用微波对Ops进行碱解，克服了以上方法的缺点，并能在碱解Ops的同时对PCBs萃取富集，缩短了分析时间，通过测定合成土壤样品中的PCBs，获得了较满意的结果。



2 实验部分

2.1仪器和试剂

MK-1型压力自控微波炉(上海新科微波技术应用研究所)：HP-4890系列气相色谱仪配电子捕获(ECD)检测器和HP-6890气相色谱仪带质谱检测器(MSD-5973 ) ( Hewlett-Packard, USA)，30 m x 0. 25 mm x 0. 25μn HP-5和HP-5MS熔融石英毛细管柱：R-201型旋转蒸发器(上海申科机械研究所)。

氢氧化钾、浓硫酸:分析纯。无水硫酸钠:分析纯，650℃灼烧4h，贮于密封瓶内，使用时先用正已烷淋洗。甲醇、乙醇、丙酮、石油醚、正己烷等均为分析纯，使用前经精制。PCBs：PCB1242 (Ultra Scientific, USA)，浓度100.00 mg/L，甲醇为溶剂。

8种Ops 混合标准(α-HCH、β-HCH、γ-HCH、 δ-HCH、o , p-DDT、p , p-DDE 、p , p- DDD、p, p -DDT)、艾试剂、狄试剂:国标溶液，各化合物浓度均为100.00 mg/L，石油醚为溶剂。

2.2仪器操作条件

GC条件 进样口温度250 ℃，柱温采用程序升温，初温80℃，保持1 min后以10℃/min速度升至200℃保持0.5 min，再以3 ℃ /min升至230℃，保持2 min，再以15 ℃ /min升至280℃，保持5 min。氮气流速10mL /min。采用不分流进样，进样量为2μL。

GC-MS条件 接口温度280℃ , EI离子源，电子能量70 eV，离子源温度230℃，四极杆温度150℃，电子倍增器电压1500 V，质量扫描范围30~550 amu。氦气流速为1.0 mL/min。采用不分流进样，进样量为2μL。升温程序同GC一致。

2.3试样的采集与制备

含多氯联苯与Ops的合成土壤样的制备：采集土壤表层样(有机碳含量~1%)，风干、去

杂、研碎、过筛。先后以甲醇、二氯甲烷、丙酮浸泡各24 h。去除溶剂晾干，经索氏提取后未测出PCBs。分别制得PCB1242含量为0. 16μg/g, α-HCH, β-HCH, γ-HCH, δ-HCH, o , p-DDT、p , p-DDE 、p , p- DDD、p, p -DDT含量分别为4ng/g及艾试剂和狄试剂含量分别为9.6ng/g的土壤样A及PCB1242含量为0.16μg/g的土壤样B。土壤样使用前经陈化10~15天。

2.4操作步骤

2.4.1 微波碱解(MAAD) Ops萃取PCBs 取一定量的Ops标准(或合成土壤样品)加人碱解溶液(或碱解萃取溶剂)，在微波溶样系统中接受微波辐射数分钟，倒出碱解液(或萃取液)，用提取溶剂洗活塞及试样罐两次，并与碱解液(或萃取液)合并。

2.4.2 离心碱解Ops 那取一定量的Ops于10 mL带塞离心管内，加人碱解溶剂(KOH-甲醇溶液)至l0mL。轻轻振摇1 min，置于离心机内，以3000 r/min的速度离心碱解30 min。

2.4.3 碱解液及萃取液的净化处理 向碱解液或萃取液加人5 % NaCI溶液15 mL，分别用20mL正已烷提取二次，合并提取液并用3 mL浓硫酸洗至无色，再用5 % NaCI溶液15 mL洗二次，加人8g无水硫酸钠干燥后用氮气吹扫浓缩至1 mL，用GC-ECD测定。

2.4.4 定性和定量分析 本实验利用GC-MSD进行定性分析，GC-ECD进行定量分析，以

p , p-DDE为参考物进行仪器波动校正及计算相对保留时间；以0.05 ~4 . 0 mg/L范围内5种

PCB1242同分异构体峰高和作定量分析。

农药残留检验方法系列讲座（54）（下）微波碱解消除土壤中有机氯农药干扰

3结果与讨论

3.1 微波碱解条件的优化

3.1.1微波加热功率、压力的条件 鉴于微波加热特性，为避免加热时间的不均匀性，微波输出功率选择为100%;而为避免溶剂泄漏，将压力控制置于第一档(0.5 MPa)，且一次加热时间不超过8 min[3,4]。

3.1.2微波碱解Ops的条件 由于微波功率及压力已确定，因而本实验选择0.16μg PCB

1242+Ops (2 ng 8种Ops+6.4 ng艾试剂、狄试剂，25 ng 8种 Ops+40 ng艾试剂、狄试剂，50 ng 8种Ops + 80 ng艾试剂、狄试剂)；碱解液体积(20,25,30 mL)及类型(1 mo1/L KOH-甲醇溶液，1mol/L KOH-乙醇溶液，1 mol/L KOH-甲醇溶液十正己烷 (V/V=4:1))；微波加热时间 (2,4,6min) 按四因素三水平正交设计进行试验，选择最佳实验条件。实验结果列于表1。




从表1结果可知α-HCH, β-HCH, γ-HCH, δ-HCH, o , p-DDT、p, p -DDT在本实验条件下均能全部碱解；p , p- DDE碱解率为负值，表示其色谱峰有所增高，主要是由于

p, p-DDE不能完全碱解且其为p , p -DDT的碱解产物的缘故；艾试剂及狄试剂能部分碱解，碱解程度随微波条件而异，在微波加热2 min时，艾试剂、狄试剂只有20%左右的分解，微波加热4 min或6 min其碱解程度可达41.7%~61.6%，由于微波加热6 min后萃取溶剂有10%左右的泄漏，易引起Ops损失使碱解率增加，加热4 min基本无溶剂泄漏，故从总体来说，微波碱解最佳条件为：1 mol/L的KOH-甲醇溶液30 mI,、微波加热时间4 min，本文还在此实验条件下对5 mg/L Ops进行碱解，发现Ops的碱解率与50μg/L含量相当，因而Ops的含量对碱解率影响不大。

本文还进一步就各种Ops碱解后是否具有色谱峰进行了试验，结果α-HCH, β-HCH, γ-HCH, δ-HCH、艾试剂、狄试剂其碱解产物无色谱峰出现，说明这些物质经碱解后不干扰PCBs测定，而o , p-DDT、p, p -DDT, p , p-DDD却出现新峰，但也不干扰测定。经GC-MS确证为o ,p -DDE , p , p -DDE、一氯-2,2一双(对氯苯)乙烯(DDMU)色谱峰，其中o ,p -DDE, p , p-DDE分别为o ,p –DDT、p,p -DDT的分解产物，DDMU为p , p-DDD分解产物(图1)。



本文还对碱解溶剂中是否加入少量水作了对比实验，从实验现象发现加水溶剂其到达指

定压力的速率较快，且溶剂泄漏少。可能是由于水比较容易接受微波能量而使加水溶剂到达

指定压力速率快；另外，水还能与所使用溶剂形成共沸化合物，使有机溶剂挥发性降低而不易泄漏。因而，所有碱解及萃取溶剂都加人2 mL水。

3. 2 微波碱解Ops同时萃取PCBs的效果

称取2.0 g合成土样，于上述最佳碱解条件下进行实验，并同时用正己烷+丙酮( V/ V,1:

1)、甲醇作为溶剂进行萃取，平均回收率列于表2。正己烷+丙酮是最常用的土壤中有机物质的萃取剂，而甲醇由于其具有较强的渗人土壤内部能力也被人采用，从表2结果可知，3种溶剂对于纯标准物质其PCBs的回收率都较高，用l mol/L KOH-甲醇溶液微波碱解与萃取时其PCBs回收率达 98.2%，说明微波碱解没有产生PCBs的损失。1 mol/L KOH-甲醇溶液萃取合成土壤样B中PCBs的回收率为86.4%，与正己烷+丙酮、甲醇溶剂作用结果相当(分别为88.3%,83.7%)，且能够较理想地消除合成土壤样A中Ops的干扰，其PCBs的回收率为84.1%，实现了在萃取过程中同时消除Ops的干扰，节省溶剂，操作简单，缩短了分析时间。



3.3 MAAD与离心碱解效果的比较

通过离心碱解与微波碱解的结果(表3)比较，发现离心碱解30 min,β-HCH碱解不完全，

艾试剂(Aldrin)、狄试剂(Dieldrin)碱解率分别为33 . 8 % , 21. 3 % , MAAD时处于高温、高压条件下，β-HCH碱解完全，艾试剂、狄试剂碱解率有一定程度提高，分别达到55.3%、61.6%，p, p-DDE离心碱解含量比MAAD高主要原因是其在微波条件下有部分碱解(约50%)而离心碱解却较少(20 % )。 MA AD较离心碱解另一优势为其可在萃取时同时碱解而离心碱解只能在萃取以后才能进行。

3.4 碱解液(萃取液)净化

为避免碱解液(萃取液)在提取过程中出现乳浊层(特别是正己烷+丙酮)，一般使用5 %

NaCI溶液进行洗涤。由于狄试剂碱解不完全，因而利用浓硫酸作进一步处理。实验表明，

经过一次酸处理，狄试剂还有明显残留，二次酸处理可完全消除狄试剂的影响。同时还可去除多数试样中及碱解过程中产生的杂质峰及部分艾试剂。



4 结论

本文优化了微波碱解Ops的条件，在最佳的实验条件下测定合成土壤样中PCBs时能有效地消除Ops对其测定的干扰，PCBs回收率达到84.1%~86.4%，与传统萃取溶剂正己烷+丙酮的萃取回收率相当。微波碱解与萃取相结合，具有快速、高效、消耗溶剂少、准确度高等优点，适用于环境、生物样品中PCBs的快速分析测定。

农药残留检验方法系列讲座(55)GC-ECD测定动物性食品26种有机氯农药残留


动物性食品26种有机氯农药多组分残留量的GC-ECD测定



摘要：采用自动凝胶色谱系统进行样品前处理，通过研究26种农药在不同色谱柱的分离效果及程序升温实验参数，确定了色谱分离条件和净化过程中待测组分的收集时间段。结果表明，DM-5色谱柱分离26种农药的效果最佳。有机氯农药在凝胶渗透色谱净化系统的流出时间为7.5 ~ 12.5 min之间。加标回收实验结果表明，有机氯农药的回收率为76--105%。在GB/T 5009.162-2003基础上，该方法有机氯农药的种类由原来的13种增加到26种。

本文由青海省疾病预防控制中心的张辉和青海省农产品质量监测中心的陈建宁研究人员参考国标（GB/T 5009.162-2003）方法共同完成在鱼、肉和蛋中的农药残留分析方法。现全文介绍如下：



前言

食物样品基质成分复杂，不同农药品种的理化性质差异大。外标法测定过程中，前处理方法对分析时间和测定结果影响很大。该方法在GB/T 5009.162-2003[5]基础上，改用全自动凝胶渗透色谱系统(GPC)进行样品的净化处理，同时增加了氯丹的异构体顺氯丹、反氯丹和氯丹的代谢产物氧氯丹[6]，硫丹的异构体α-硫丹、β-硫丹和硫丹硫酸盐，异狄氏剂及异狄氏剂的裂解产物异狄氏剂醛和光解产物异狄氏剂酮，五氯硝基苯及其代谢产物五氯硫醚、五氯苯胺[6]，六氯苯和灭蚁灵，有机氯农药的种类由原来的13种增加到26种。本文建立的同时检测动物介质中26种农药的方法，LOD、LOQ均在我国、美国和FAO/WHO规定的最大残留限量以下，符合《残留分析质量控制指南》和欧盟委员会指令2002/657/EC的要求。



实验

一、试验方法

1 仪器

Agilent 6890气相色谱仪；旋转蒸发仪；AccuPrepTM自动凝胶色谱系统。

2 试剂

丙酮（AR，重蒸）；石油醚（沸程：30～60℃，AR，重蒸）；乙酸乙酯（AR，重蒸）；环己烷（AR，重蒸）；正己烷（农残级）；氯化钠（AR）；无水硫酸钠（AR）；氮气（≥99.5%）。26种有机氯农药标准品（购自）

3 农药标准品及标准溶液

26种有机氯农药标准品（纯度>99％）。标准溶液的配制：准确称取各农药标准品，用少量苯溶解，再以正己烷稀释成一定浓度的储备溶液。量取适量标准储备溶液，以正己烷稀释为混合标准溶液。

4 样品制备

4.1样品预处理：

蛋品去壳，制成匀浆；肉品去筋后，切成小块，制成肉糜；鱼肉去骨刺，制成鱼肉糜；乳品混匀待用。

4.2 提取

4.2.1 称取蛋类样品20 g（精确到0.01 g），于200 mL具塞三角瓶中，加水5 mL，加40 mL丙酮，振摇30 min，加氯化钠6 g，充分摇匀，再加30 mL石油醚，振摇30 min。静置分层后，将有机相全部转移至100 mL具塞三角瓶中经无水硫酸钠干燥过夜，取35 mL上清液于旋转蒸发瓶中，浓缩至约1 mL，加2 mL乙酸乙酯－环己烷（1:1，V/V）溶液并转移至GPC自动进样系统配套试管中，用乙酸乙酯－环己烷（1:1，V/V）溶液洗涤旋转蒸发瓶3次，将洗涤液合并至试管中并定容至10 mL。

4.2.2 称取肉类试样20.0 g（精确到0.01 g），加水15 mL（视样品水分含量加水，使总水量约20 g）。加40 mL丙酮，振摇30 min，其后的提取方法同4.2.1蛋类样品的提取步骤。

4.2.3 称取乳类试样20.0 g（精确到0.01 g。鲜乳不需加水，直接加丙酮提取。）其后的提取方法同4.2.1蛋类样品的提取步骤。

4.3 净化

样品通过5 mL样品环注入GPC柱，泵流速5.0 mL/min，弃去0 ~ 7.5 min 流分，收集7.5 ~ 15min流分，15 ~ 20 min冲洗GPC柱。洗脱液为乙酸乙酯－环己烷（1:1，V/V）混合溶液。将收集的流分旋转蒸发浓缩至约1 mL，用氮气吹至近干，以正己烷定容至1 mL，待GC分析。

5 色谱条件

色谱柱：DM-5石英弹性毛细管柱，30 m×0.32 mm×0.25 μm。柱温：程序升温为



。进样口温度280 ℃。检测器（ECD）温度300 ℃。载气流速N2：流速1mL/min，柱前压0.5 MPa。不分流进样，进样量1 μL。

6 测定

分别吸取混合标准液及样品净化液注入气相色谱仪中，记录色谱图，以保留时间定性，以样品和标准的峰高或峰面积比较定量。

二、结果

1 色谱分离条件

1.1 色谱柱的选择

选用OV-101柱(30m×0.25mm×0.25μm)，DM-1(30m×0.25mm×0.25μm)和DM-5(30m×0.25mm×0.25μm)进行尝试，通过比较发现DM-5(30m×0.25mm×0.25μm)色谱柱分离效果最好。其色谱图如图1。



图6 有机氯农药分离色谱图

这26种有机氯农药的出峰顺序依次为 1.α-六六六 2.六氯苯 3.β-六六六 4.γ-六六六 5.PCNB 6.δ-六六六 7.PCA 8.七氯 9.PCPs 10.艾氏剂 11.氧氯丹 12.环氧七氯 13.反氯丹 14.α-硫丹 15.顺氯丹 16.p,p’-滴滴伊 17.狄氏剂 18.异狄氏剂 19.β-硫丹 20.p,p’-滴滴滴 21.o,p’-滴滴涕 22.异狄氏剂醛 23.硫丹硫酸盐 24.p,p’-滴滴涕 25.异狄氏剂酮 26.灭蚁灵



1.2 线性实验

分别吸取系列混标溶液进样，记录峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制线性曲线，并进行线性回归计算，结果见表1。

农药残留检验方法系列讲座(55)（下）GC-ECD测定动物性食品26种有机氯农药残留



注：A=0

2 净化方法研究

本文前处理净化方法改用凝胶色谱净化系统(GPC)去除脂肪和蛋白质等大分子干扰物。方法采用仪器推荐流速5.0 mL/min进行洗脱，以紫外检测器(254 nm固定波长)检测26种有机氯农药的流出时间以确定待测组分收集时间带。



由紫外吸收图2可见，有机氯农药混标溶液的流出时间在7.5 ~ 12.5 min之间。

3 检测限和定量限试验

本方法检测限根据7种基质（分别为猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、鱼肉、鸡蛋、和牛奶）中的最低加标水平以各目标组分的3倍平均信噪比对应的浓度为检测限 (limit of detection, LOD)，10倍平均信噪比对应的浓度为定量限 (limit of quantification, LOQ)，平行测定3次，取平均值作为该方法的LOD及LOQ，结果见表2和表3。

表2 7种基质中各有机氯农药的最低检测限（μg/kg）







4 精密度和准确度试验

选择猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、鱼肉、鸡蛋和牛奶为基质，进行多次重复测定，得到各基质样品的背景值。在基质中，分别添加两个水平的混标溶液，按给定方法平行测定7次，结果见表4。

三、讨论

1. 本方法在GB/T 5009.162-2003基础上，增加了氯丹的异构体顺氯丹、反氯丹和氯丹的代谢产物氧氯丹，硫丹的异构体α-硫丹、β-硫丹和硫丹硫酸盐，异狄氏剂及异狄氏剂的裂解产物异狄氏剂醛和光解产物异狄氏剂酮，五氯硝基苯及其代谢产物五氯苯酚、五氯苯胺、六氯苯和灭蚁灵，有机氯农药的种类由原来的13种增加到26种。

2. 本方法中的26种农药的LOD、LOQ均在我国、美国和FAO/WHO规定的最大残留限量以下，符合《残留分析质量控制指南》和欧盟委员会指令2002/657/EC的要求。

3. 除异狄氏剂醛外，所有农药的回收率都在80%~115%间，异狄氏剂醛的回收在60%～72%间，且RSD%全部小于20%，完全可以满足多残留农残检测的要求。

4. 与GB/T 5009.162-2003中传统的重力GPC色谱层析净化技术相比，全自动的GPC系统方法规范、净化效率高、操作简单。所采用DM-5弹性石英毛细管柱可在52 min内完成26种有机氯农药多组分测定，提高了分析效率。



参考文献

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[2] 林维宣，王凤池.各国食品中农药兽药残留限量规定[M].大连：大连海事大学出版社，2002

[3] 王绪卿，吴永宁等编著，色谱在食品安全分析中的应用，北京市：化学工业出版社，2005年

[4] Makovi CM, Ed. Pesticide Analytical Manual Vol. 1: Multiresidue methods. 3Rd Edition 1994 revised 1999. U.S. Food and Drug Administration

[5] GB/T 5009.162-2003 动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留测定方法

[6] GB/T 6397