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  • 风肃

    第31楼2010/07/11

    看完才知道很多不懂,豁然开朗!希望楼主定期开展类似的讲座!

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  • xue2009

    第32楼2010/07/11

    为什么梯度相比等度影响灵敏度?在等度出的很低的峰在梯度却可以出的较高。还有一个未知样品你讲的是有机相比例从5%-100%先试着做做。我觉得还是先用纯有机相走比较好,这样大致确定下时间,为调整梯度打基础。

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  • xue2009

    第33楼2010/07/11

    对于你说的“样品溶液中同时含有目标化合物和强保留化合物”用梯度比较好,呵呵,我们一般都是保证目标样品出峰后就调整为100%有机相把强保留性组分洗脱出来,这样也省时。

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  • xue2009

    第34楼2010/07/11

    我还有听说过浓度梯度等一些其它的梯度不知道是怎么回事?望解释,谢谢

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  • xue2009

    第35楼2010/07/11

    梯度变化速率降低,k*值增加,色谱峰的区域宽度增加,灵敏度下降;k*值增加能理解,后面的没理解。谢谢解答

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  • 微雨燕双飞

    第36楼2010/07/12

    答:
    这有针对保留因子相差较大的一组化合物分析时,梯度洗脱才能给出较好的灵敏度,原因如下:如果采用低洗脱强度的流动相,那么强保留组分出峰较晚,峰展宽严重,响应值降低,所以灵敏度不高;如果采用高洗脱强度的流动相,强保留组分也较早出峰,此时虽然峰响应值高,但一般分离度不好;梯度洗脱时,流动相组成是连续变化的,起初洗脱强度低,没有化合物流出,随着流动相洗脱强低逐渐增大,化合物的保留因子也逐渐降低,化合物逐渐被洗出,在这一过程中,化合物的保留因子是变化的,每一组分被洗脱出来时,其平均保留因子很小(一般处于2~5之间),所以峰展宽较小,灵敏度也很高。
    对于您第二点说法,也许是见仁见智,各有妙招。

    xue2009(xue2009) 发表:为什么梯度相比等度影响灵敏度?在等度出的很低的峰在梯度却可以出的较高。还有一个未知样品你讲的是有机相比例从5%-100%先试着做做。我觉得还是先用纯有机相走比较好,这样大致确定下时间,为调整梯度打基础。

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  • 微雨燕双飞

    第37楼2010/07/12

    答:这也是梯度洗脱,难道不是吗?

    xue2009(xue2009) 发表:对于你说的“样品溶液中同时含有目标化合物和强保留化合物”用梯度比较好,呵呵,我们一般都是保证目标样品出峰后就调整为100%有机相把强保留性组分洗脱出来,这样也省时。

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  • 微雨燕双飞

    第38楼2010/07/12

    答:保留因子增大,色谱峰的区域宽度增大,“色谱峰区域宽度”是峰宽的标准说法,这句话简单说就是k*值增,峰宽也增加。根据塔板理论,化合物的保留因子增大,流出色谱柱时其分布的塔板数量就越多,色谱峰峰宽更大。梯度洗脱时与等度洗脱时均如此。

    xue2009(xue2009) 发表:梯度变化速率降低,k*值增加,色谱峰的区域宽度增加,灵敏度下降;k*值增加能理解,后面的没理解。谢谢解答

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  • chqiu111111

    第39楼2010/07/12

    好东西,用得着!

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  • 微雨燕双飞

    第40楼2010/07/12

    答:您这个问题没有语境,很难判断“浓度梯度”的具体含义。在这里我把色谱分析中可能遇到的“浓度梯度”说一下:
    浓度梯度是指同一介质的不同位置或当介面两侧溶液间存在浓度差时,高浓度侧与低浓度侧的溶质在空间上的分布是均匀递减的,此种浓度差在空间上的递减称为浓度梯度。色谱分析中,进样以后往往存在浓度梯度,浓度梯度的存在会促使样品分子在三维空间内扩散,进而导致色谱峰展宽,这就是速率理论中的分子扩散项。液相色谱中由于流动相是液体,化合物在其中的扩散比较缓慢,所以分子扩散项影响不显著;气相色谱中流动相是气体,化合物在其中的扩散比较迅速,分子扩散项些影响显著。

    xue2009(xue2009) 发表:我还有听说过浓度梯度等一些其它的梯度不知道是怎么回事?望解释,谢谢

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