plexu
第108楼2010/07/27
普通C18柱作为正相柱使用,我还没听说过。正相色谱分离模式是指固定相的极性比流动相的极性大,反过来,流动相极性大就是反相。C18固定相属于疏水性相对比较强的,疏水性强就是极性很弱,应该找不出极性比它更弱的流动相了。
正相体系常见的柱子有:硅胶柱、氨基柱、CN基柱和Diol二醇基柱,最普通的应该就是硅胶柱。正相柱和反相柱比,最需要注意的是水分,正相柱对水分非常敏感,流动相中水分含量的些微变化对保留时间影响很大,因此正相柱测定前平衡时间需要几个小时甚至更长。
plexu
第109楼2010/07/27
plexu您好!我有以下问题想请教,
请问:HPLC柱前衍生和柱后衍生的相关问题?
1、为什么要衍生?
2、衍生化的分类?
3、进行衍生,适用的化合物有哪些?
4、进行衍生化的要求有哪些?
5、柱前衍生和柱后衍生的优缺点?[/quote]
问题有些多,先回答前2个。
色谱技术中的化学衍生法系指在色谱过程中用特殊的化学试剂(一般称为衍生化试剂或标记试剂)使样品成分转变相应的衍生物之后进行分离检测或进行检测的方法。目的为:1.将紫外—可见强吸收功能基团引入被检测对象或将其转变为荧光衍生物,以提高检测灵敏度;2提高对分析样品的分离和选择性。
从是否与HPLC系统联机的角度,化学衍生法分为在线on line)与离线∣Off line)两种。从发生衍生化的场合,分为柱前衍生法pre-column derivatization)与柱后衍生法(post-column derivatization)两种。目前,在HPLC中,以离线的柱前衍生法(简称柱前衍生法)与在线的柱后衍生法(简称柱后衍生法)使用居多。
[/quote]
柱前衍生优点:可以人工衍生,操作简单。缺点是,引入了副产物,对柱子可能有负面影响,而且人工衍生也会使结果的准确度和重现性有差异。
柱后衍生优点是:重现性好,引入物质少。缺点是,有扩散问题,在柱子中分离结束后,就存在扩散,如果衍生慢(必然流速低)、管路长扩散问题就会比较严重,对于设备要求较高。[/quote]
非常感谢xue2009的总结,这里再补充一点,适合衍生的化合物包括脂肪族的醇、醛、酮和羧酸类,以及各类氨基酸。
plexu
第113楼2010/07/28
不锈钢毛细管接头有个缺点,用过一次后卡匝位置和距离毛细管末端的长度就固定死了。如果下次用的色谱柱的柱头接口深度和原来的不同,就容易产生死体积和泄漏。产生的死体积一般不大,如果只引起柱效的稍微下降而没引起拖尾,这个问题就容易被忽略。引起大家关注的是泄漏,如果用了新柱子,发现和毛细管的接口处有泄漏,就可以判断是接头的匹配问题。最好的判断方法还是:询问一下厂商色谱柱柱头的类型和柱头接口的深度,然后和毛细管接头的规格比较。
如果用PEEK接头,发生问题的情况就大大减少,因为PEEK接头卡匝位置是不固定的。
月旭用的色谱柱柱头标配类型是Valco型,不过也可提供Parker型和Waters型等。
接头与色谱柱的匹配,并没有在实际色谱应用中造成很大的问题,有很多人都没有关注到这个问题。一方面原因是使用PEEK接头的情况很普遍,另外如果发现不匹配,换个毛细管接头还是非常方便的。
小卢
第117楼2010/07/28
真是很感谢提供!原来只看标准里面的规定了,忽略了这里的建议。这是usp31里的内容吧,我也去找找!