非常欢迎您的提问！一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。

具体测定时的样品处理方法是这样的（所用胶囊是上海衡生药业有限公司生产的）：

取250mg胶囊内容物（约相当于一粒胶囊内阿莫西林的含量），溶于250ml流动相中，得YP1，取出部分YP1溶液过滤，取滤液用流动相稀释至0.5mg/ml 的浓度，得YP2，用YP2进样。

感谢月旭在本版面做论坛线上讲座！
plexu您好！我有以下问题想请教：
1、对于一根常用的C18住，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？希望能够详细些，非常感激。
2、测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？

您好！我想问一下，氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，如使用一段时间后，柱效降低，峰形改变，如何恢复？

plexu您好！我有以下问题想请教,也算是讨论吧:

目前的色谱柱，就跟色谱仪器一样，国内的东西还是赶不上国外的，不管是从填料的开发上还是色谱柱技术上，我觉得都还有一定的距离。厂家所宣传的技术有很多，让我们使用者也是看的眼花缭乱，真正要选择自己喜欢的柱子，还得不断试验，或者是选择品牌。填一根柱子，就好像做包子，用不同的馅、不同的搓面方法，味道都相差很大，开发方法中一但选中了一个品牌的柱子我们也很少去更好。
问题：
1.色谱柱的技术都有哪些？比如封尾等，这些技术在应用时都体现在哪里？
2.色谱柱技术的差距在哪里？

新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。
如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。

分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。

讲的都很基础，都是些最基本的东西。

“正相柱保存溶剂一般为正己烷，如果要转换成HILIC柱模式使用，由于正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好，转换中间需用二氯甲烷或乙酸乙酯过渡。”

貌似一般用异丙醇过渡就行了吧

plexu您好！我有以下问题想请教：
柱子在什么情况下可以清洗一下筛板呢？
原来也讨论过这个问题，我也拆下来清洗过，但我看到柱前段的污染更甚，于是就用刀片刮了刮，然后把清洗好的筛板安装上去。问题解决了，但使用寿命会不会减少呢？

氨基柱测酸性样品，应该是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。