应助达人

可能是含这个N,N-二甲基辛胺引起平衡时间久，楼主把这个去掉，其它的流动相成分和比例都不变看看能不能把基线走稳？

流动相比例是不是不对？

不知你这方法是怎么来的，如果不是标准方法，很可能是流动相的问题。N,N-二甲基辛胺是有一条C10的烷基，这种物质和C18柱子保留肯定是很强的（C10和C18是很相似的，相似相溶，并且非极性很强，很洗脱下来）。这应该是离子对色谱，离子对色谱很难平衡，所以漂移比较大，第一天不能出峰，第二天色谱柱已经被流动相饱和了，出峰了。但是也不能完全洗脱，所有出现很多小峰。你这根色谱柱里面的流动相（N,N-二甲基辛胺）很难洗脱完全，以后很难用于测其他样品。

加大有机相比例有什么根据或具体原因吗？不太明白。。。

我感觉也好像是这个试剂在作怪，但是药典里方法要求这样，也不能说去掉就去掉啊

这个方法是中国药典里面的，你这么一说还真是有道理啊，解释得很合理，可是这样的话柱子不就麻烦了吗？用什么办法补救才好呢？

应助达人

没要你在分析的时候真把这个去了，只是为了检验一下是不是这个试剂的原因，如果是的话换一瓶其它厂家最新生产的试试看。

是药典的方法肯定是经过很严格的验证的成熟方法。但要注意几个方面：
1.试剂有没有加错（主要是这个N,N-二甲基辛胺）：包括错或变质的试剂、称量错误、稀释倍数错误。
2.C18之间有很大的不同。有的C18碳的履盖率特别大，就保留很强。所以难平衡。可考虑另一柱子：可用一简单的方法：用柱效测定液，相同的条件，保留时间短的对这个试剂保留应该弱一些。
3.这里面的缓冲液和乙腈的比例是可调的：这也是药典规定的----只要求你必须加入这二种组份（这种缓冲液和乙腈），但比例是可以调整的。有机相增加会加快平衡和洗脱。

另外加热柱子可以加快平衡和洗脱。最高温度可到50℃(可以长时间使用的温度，但不同的柱子可能有些不同)。

使用色谱纯试剂，试剂纯度不高会造成基线不稳，另外色谱柱原因也很大，用甲醇进行冲柱，查看柱压是否稳定，系统内有气泡也会出现这种现象，使用在线脱气机效果较好，还要杳看系统是否有泄漏，有的液相色谱泄漏出的液体汇入废液，不会被感应器杳觉，另外样品中含有大分子不明物质没有被洗出会出现基线飘移，千万不要叠氮化钠作水防腐剂，这东西造成基线噪声大。