花椒麻味物质是一类物质的总称。那你的标准品是混合物还是单一物质呢？感觉你的对照品就不纯。

再看你的描述，含有α-sanshool、α-山椒素、β-sanshool、β-山椒素、γ-sanshoo、α-sanshoamide、α-山椒酰胺，这些物质结构都应该比较相似，而且在分离纯化的时候不会很容易。
你现在的梯度是什么样的？减缓梯度和降低初始梯度有机相比例试试看

不接保护柱，还是分不开。应该不是保护柱问题。楼主把你的条件发上来看看吧

应助达人

再冲下看看能不能好些

小猪版主，你说的条件是不是流动相，梯度洗脱。
流动相50%甲醇/水，0.8ml/min。
梯度洗脱条件：0~15min，50%甲醇/水
15~26min，70%甲醇/水
26~30min，50%甲醇/水。

标准品应该是混合物，那些教授说，标准图谱上出现的三个峰的峰面积比上样品出现的三个峰的峰面积等于标准品浓度比样品浓度。
用过50%的等度洗脱，峰型和第一张图基本一致，用60%的等度洗脱，没有出峰。
减缓梯度和降低初始梯度有机相比例，我这样行不行：
0~15min，40%甲醇/水
15~26min，60%甲醇/水
26~30min，40%甲醇/水
重庆市地方标准我已经扫描上传了。

看样要更换保护住了

感谢提供了扫描。标准品是三个成分，而且结构应该是非常相似，极性较小。
地方标准的比例也是按照你说的。但是由于使用不同的色谱柱，比例要求都不一样的。
从你的峰型来看，色谱柱没有问题的，关键是三个峰没有分开。改善下流动相比例。你说的用60%的等度洗脱，没有出峰，是用60%的甲醇吗？如果是，那很奇怪。
先试试这个梯度吧。看看标准品能否分开。
0~15min，40%-60%甲醇/水
15~50min，60%-70%甲醇/水
后面先不设置。试试看

先按照上面的比例试试看，然后上个图谱吧，看看有没有改善。先摸好条件，50min虽然有些长，但是知道了什么时候出峰，再减小时间就可以了。

恩，我试试看。谢谢小猪！！！！

哈哈，刚看了你们以上的讨论，讲几点：
1）你的色谱柱没坏，不过也不是没问题，如果可能建议用一只更长的，比如250mm的，因为15分钟的分离效果仍然不理想。
2）这个梯度条件（标准方法）并不理想，15分钟后突然升到70%不合适，从你的图上看应该再设一段线性升高，比如15-20分，50%-70%。然后70%保持到25分，然后与原来一样。
3）我的感觉26楼小猪猪建议的条件可能不合适，起始浓度一下降低到40%幅度太大，然后升到60%的过程中给它们的最适浓度（假定是50%）的时间太少，会使分离度下降，甚至合并！

哦，刚看了你上传的重庆标准，你的梯度表达方式有误。
从所给条件看，最佳比例应在60-70%，50%以下的比例意义不大。另外标准确实推荐使用250mm的柱。好了先试试再说吧。