天天洗碗
第94楼2011/02/23
从上图如何看出最大吸收有干扰?我有点看不明白,老师帮忙解释下好吗?谢谢
这站不远
第95楼2011/02/23
这个问题问的非常好,谢谢
首先,导数光谱的原理zhouyuhu老师的笔记里面有,你参看一下,我也是参看他的。
具体步骤是对原谱图进行一阶处理,看干扰组分是否能分来,如果不行,建议用二阶。一般工作站提供四阶。如果还要,可能要花钱购买一些数据包。
有一点需要注意,就是在进行定量的时候,标准样品和样品的阶数一定要一致。
第二个问题,如果没有导数处理功能的工作站,可以利用orger软件进行处理,好像是这么拼写的。
2550的采用UVPROBE,是具有四阶导数处理功能的,具体操作可以参看说明书,不行的话再联系我,告诉您怎么处理。
初学者&九点虎
第97楼2011/02/23
在普通吸光光度法中,如果吸光度很小,就不能得到精度很好的信号;如果其他组分的吸收重叠在吸收峰上,测定就会受干扰。导数光谱法有可能克服这些困难。近几年分光光度计的发展,使很多仪器具有全波长扫描和导数光谱处理功能,使导数光谱有了更快更好的发展。
初学者&九点虎
第98楼2011/02/23
4导数值的测量方法
导数光谱的测量很多,下面分别说明
4.1如果基线是平坦的,可以测量峰-谷之间的距离,这是最常用的方法。
4.2在基线平坦的情况下,也可以测量峰-基线之间的距离,这时灵敏度虽有些降低,但精度较高。
4.3作两峰的连接线,测量两峰连线到谷的距离。只要基线是直线,不管它是否倾斜,总能得到正确的值。
4.4作峰顶与谷顶的切线,使其平行于基线,然后测量两平行线的距离。
以上四种方法,是前辈们总结的,非常经典的方法,但是现在,尤其是带导数处理工作站的,不具备4.3和4.4的功能,采用峰值检测,能实现4.1和4.2,而我个人认为,4.1和4.2也存在着一定的误差,所以,我重点介绍的方法马上就要闪亮登场了---积分面积.
初学者&九点虎
第99楼2011/02/23
在普通吸光光度法中,如果吸光度很小,就不能得到精度很好的信号。如果其他组分的吸收重叠在吸收峰上,测定就会受干扰。导数光谱法采用微分求导,在谱图上显示出微小的变化,使光谱图的分辨率得到了很大的提高.导数光谱的特点在于灵敏度高,可减小光谱干扰。因而在分辨多组分混合物的谱带重叠、增强次要光谱(如肩峰)的清晰度以及消除混浊样品散射的影响时有利。
1导数光谱的优势
导数光谱法有一般分光光度不具有的优势,主要表现在以下几个方面:
1.1能分辨两个或两个以上完全重叠的或很小波长差相重叠的吸收峰.
1.2能够分辨吸光度随波长急剧上升所掩盖的弱吸收峰(有人称为肩峰)
1.3能够确认宽阔吸收带的最大吸收波长
以上从谱图角度来将,从灵敏度角度来说,提高了不少,应该说很多.我曾经这么说过,一台可以进行导数光谱的紫外分光光度计,可以赶上一台带紫外检测器的HPLC,可能有点夸张,至少我个人这么认为.
1.4灵敏度
关于导数吸光光度法提高灵敏度的规律,有人指出n阶(n=1~4)导数吸光光度法的灵敏度是按4.5n倍增大。
2理论基础
2.1定量基础
其原理是因为吸光度和摩尔吸光系数为波长的函数,所以朗伯-比尔定律可以用下式表示:
Aλ=ελcl
将上式对波长进行一次微分,得
若对波长进行n次微分,可得
2.2导数光谱图的处理
吸光度对波长进行微分的微分值与吸收物质的浓度成正比,符合朗伯-比尔定律,因此它可以用于吸收物质的定量分析。
获得导数光谱的方法可分为光学微分法和电学微分法两类.现在很多带计算机的工作站都采用电学微分法,通常可以获得一、二、三、四阶导数光谱。比如俺现在用的2550,就能做到四阶.