应助达人

1.pH值不可超过2-7.5这一范围,当pH>7.5时,硅胶会释出 生成絮状物堵塞柱子,且难以复原,柱效很快降低,甚至完全失效。 pH低于2时，则键合相会发生水解脱落。
2.300A，500A，1000A几种孔径，更侧重体积排阻原理.
3.头孢类的目标物的分子量一般都比较小，基本上都是600或者不超过600 的样子。因此，小孔径（120埃）的色谱柱填料对其有更好的选择性。而且硅胶上键合的亲水性聚合物以及亲水性二醇基官能团，对属于极性物质的头孢类的选择性有进一步的增强趋势，能获得更好的峰形和分离度。而蛋白及多肽物质的分子量一般都在几万到几十万，最多不超过百万，300埃的孔径的色谱填料适用于分子量为5000~1,250,000，正是蛋白及多肽物质的分子量。

3. 头孢类的目标物的分子量一般都比较小，基本上都是600或者不超过600 的样子。因此，小孔径（120埃）的色谱柱填料对其有更好的选择性。而且硅胶上键合的亲水性聚合物以及亲水性二醇基官能团，对属于极性物质的头孢类的选择性有进一步的增强趋势，能获得更好的峰形和分离度。

而蛋白及多肽物质的分子量一般都在几万到几十万，最多不超过百万，300埃的孔径的色谱填料适用于分子量为5000~1,250,000，正是蛋白及多肽物质的分子量。

流动相的pH值对色谱柱也有影响,特别是对化学键合硅胶填料,水溶液的pH最适范围在2~7.5之间,当pH>8时,硅胶会释出生成絮状物堵塞柱子,且难以复原,柱效很快降低,甚至完全失效。当在缓冲液中加入有机溶剂,盐类的溶解度下降,会析出盐沉淀,堵塞柱子。同时流动相中的有机溶剂和盐会腐蚀色谱柱头的筛板,产生柱头凹陷。流动相的极性对柱子也有一定影响,对于硅胶柱,甲醇、水、冰乙酸等极性较大物质会破坏填料,反之,对于化学键合硅胶,极性小的物质也起同样的作用。

1、月旭SEC色谱柱的pH适用范围是2-7.5。为何这样规定呢？请分别说明在流动相低于2，以及高于7.5的情况下，填料会发生什么情况。

答：流动相的pH值应控制在2〜8之间。当pH值大于8
时，可使载体硅胶溶解；当pH值小于2时，与珪胶相连的化
学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用PH值大于8的
流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具
有高表面覆盖度的键合硅胶填充剂、包覆聚合物填充剂、有
机-无机杂化填充剂或非硅胶基键合填充剂等；当需使用PH
值小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧
链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八
垸基硅烷键合硅胶填充剂、有机-无机杂化填充剂等。

排阻色谱主要被用与分离大分子物质，其分离范围从相对分子质量2000～2000000之间，这些物质大多是生物化学物质和聚合物等。此外，排阻色谱越来越多的应用是通过测量相对分子质量分布来鉴定高聚物及研究高聚物聚合机理、聚合工艺、条件等。

1. pH值的范围为2~7.5，我感觉是因为硅胶基质的原因。因为该款色谱填料是在硅胶的基础上键合上亲水性聚合物和亲水性二醇基官能团得到的。一般来讲，硅胶颗粒在pH为2~8范围内是以刚性球形的状态存在的。低于2或者高于8，可能改变硅胶的物理性能，严重的可能使硅胶基质变形或者溶解。
所以，选择2~7.5的pH范围是合适的，而且是安全的。

pH低于2的时候，硅胶颗粒可能会发生蜷曲，影响分离性能；大于8的时候，硅胶可能会发生溶解，造成不可逆的损害。

3、Ultimate® SEC 120 Å小孔径色谱柱为什么更适合分离头孢类等极性目标物；300 Å适合分离蛋白、多肽等生物大分子?

答：头孢类聚合物主要指分子量约在700分子量以上的一类物质，120Å其测试分子量范围500～25000。而蛋白和多肽分子量恰好在测试范围为1000～100000内，用300Å较合适。

排阻色谱的分离机理是立体排阻，样品组分与固定相之间不存在相互作用的现象。色谱柱的填料是凝胶，它是一种表面惰性，含有许多不同尺寸的孔穴或立体网状物质。凝胶的孔穴大小与被分离的试样大小相当。仅允许直径小于孔开度的组分分子进入，这些孔对于流动相分子来说是相当大的，以致流动相分子可以自由地扩散出人。对不同大小的组分分子，可分别渗入到凝胶孔内的不同深度，大个的组分分子可以渗入到凝胶的大孔内，但进不了小孔，甚至于完全被排斥。小个的组分分子，大孔小孔都可以渗进去，甚至进入很深，一时不易洗脱出来.排阻色谱主要被用与分离大分子物质，其分离范围从相对分子质量2000～2000000之间.