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fengmo4668
第33楼2013/01/20
呵呵
houjjun(houjjun) 发表:[div]原文由 houjjun(houjjun) 发表:罗丹明B检测
简介
罗丹明B(Rhodamine B)又称玫瑰红B，或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料。经老鼠试验发现，罗丹明B会引致皮下组织生肉瘤，被怀疑是致癌物质。罗丹明B在溶液中有强烈的荧光，用作实验室中细胞荧光染色剂、有色玻璃、特色烟花爆竹等行业。曾经用作食品添加剂，但后来实验证明罗丹明B会致癌，现在已不允许用作食品染色。近几年发现某些不法分子仍用此物作为食品添加剂，制造危害。
分子式：C28H31ClN2O3
分子量：479.01
结构式：
性状：
绿色结晶或红紫色粉末，易溶于水、乙醇,微溶于丙酮、氯仿、盐酸和氢氧化钠溶液；水溶液为蓝红色，稀释后有强烈荧光，其水溶液加入氢氧化钠呈玫瑰红色，加热后产生絮状沉淀。于浓硫酸中呈黄光棕色，带有较强的绿色荧光，稀释后呈猩红色，随后变为蓝光红色至橙色。醇溶液为红色荧光，最大吸收波长552nm，最大荧光波长610nm，激光峰值波长610nm，调谐范围 578～610nm。
实验部分
原理
采用非极性有机溶剂（如正己烷、正己烷+丙酮等）将罗丹明B 从食品中溶解并提取出，提取液流过中性氧化铝固相萃取小柱吸附罗丹明B，用非极性有机溶剂（如正己烷）洗脱样品油脂和食品内源性干扰物，再用极性有机溶剂（如甲醇）将罗丹明B从小柱上洗脱并收集，用反相高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱[/url]仪（紫外-可见光检测器）检测。
用罗丹明B染色后的花椒
试剂及配制
1、正己烷（分析纯）、 丙酮（分析纯）、 甲醇（色谱纯）、超纯水；
2、 20%丙酮的正己烷液：取100ml丙酮加400ml正己烷混合，作为罗丹明B的提取液和净化液。 氧化铝固相萃取小柱：取5 ml塑料注射器管，下端口塞入小块脱脂棉，装入处理好的氧化铝约3cm高，放置备用。
3、 罗丹明B标准溶液：称取罗丹明B 5.0mg，用20%丙酮的正己烷液溶解，并定容至50ml，配成含量为100ug/ml的标准储备液。取此液0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0ml，用20%丙酮的正己烷液稀释并定容至50ml，配成浓度为 0.0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0ug/ml标准系列溶液。
仪器：
1、高效液相色谱仪（紫外-可见光检测器）；
2、超声波；
3、震动仪；
4、固相萃取装置及小柱
5、浓缩装置
样品前处理：
提取和纯化：
1、辣椒粉：取辣椒粉1g，加入20ml含20%丙酮的正己烷，震摇10分钟，静置或过滤使分离出上层清液，残渣加入10ml含20%丙酮的正己烷重复提取一次，合并2次提取液，混匀，用滴管将上清液加入氧化铝小柱中[小柱预先用5ml提取液润湿]，视颜色深浅决定上柱量，保证上完样的小柱中下部仍为白色，含罗丹明B的样品提取液在柱上部会出现鲜亮的粉红色的荧光条带，且粉红条带随含量的增加而加深和加宽，不含罗丹明B的样品提取液不会出现粉红色条带，只会出现黄红色的不清晰的宽带，用含20%丙酮的正己烷洗小柱，粉红色的条带不下移，但更清晰，其余的黄红色带下移可大部分被洗脱出，可判断为含罗丹明B的可疑样品，待洗柱的流出液无色时，滴入5-10ml甲醇，将罗丹明B色带洗下并收集，用甲醇定容后，注入高效液相色谱仪进行确认。
2、辣椒油：称取辣椒油1g，加入10ml含20%丙酮的正己烷，混合均匀后滴入氧化铝小柱中， “用滴管将上清液加入氧化铝小柱……注入高效液相色谱仪进行确认”参考上一步操作。
3、其它食品：对于使用了红辣椒油（粉）调味的食品（如红油豆制品、红油鱼干等）称取10-20g，用20%丙酮的正己烷洗下红油（粉），或将样品与洗脱液搅成匀浆将罗丹明B溶解提取出，将样品液静置或离心，分出有机相，根据水分的多少加入适量无水硫酸钠脱水， “用滴管将上清液加入氧化铝小柱，注入高效液相色谱仪进行确认”参考上一步操作。含量少的样品因粉红色条带太窄和颜色较淡肉眼看不清楚，仍可采用上述办法，进一步用20%丙酮的正己烷洗涤小柱至流出液无色时，滴入5-10ml甲醇，将罗丹明B色带洗下并收集，经浓缩后，注入高效液相色谱仪进行确证检验。
色谱条件
色谱柱：Xtimate C18柱 4.6mm X 250mm（5μm）
流动相：甲醇：水=75:25（V/V）
流速：1ml/min
波长：552nm
进样量： 20ul
柱温：室温
色谱图
计算：
定性定量：罗丹明B标准溶液保留时间定性，外标法定量。
计算公式：
Y = C×V/M
Y——样品中罗丹明B的含量（mg/kg）
C——从标准曲线上查得的罗丹明B的浓度（ug/ml）
V——测试样品总定容体积（ml）
M——样品的称样量（g）
结论：
高效液相色谱法及色谱柱 Xtimate C18（4.6mm X 250 mm，5μm），测定食品中罗丹明B，具有灵敏度高、结果准确、精密度和线性关系良好、出峰时间快、峰形好等特点。适用于辣椒粉、辣椒油及相关食品罗丹明B含量的测定。
注意事项：
①使用C18柱的性能有差异，流动相浓度应略作调整。
②在本法所给分离条件下，样品基质在罗丹明B附近无干扰峰，其他许多红色偶氮染料都有可能在罗丹明B之后出干扰峰，注意调整这些干扰峰与罗丹明B分离度。
丹明B - 食品安全事件
2011年重庆罗丹明B食品安全事件
2011年2月15日，“重庆千骄调味品有限公司”厂区内部分残留豆瓣酱和红油中查出罗丹明B。
2011年3月25日，重庆市九龙坡区质监局从重庆火锅研究所食品生产基地送检的某品牌火锅底料、麻辣鱼底料中，检验出均含有害物质“罗丹明B”。
2012年5月，长沙罗丹明B染色辣椒案
5月 芙蓉分局根据该区食安办工作交办函，查实辖区某农贸市场内雷某销售的辣椒制品含罗丹明B。芙蓉分局依法对当事人作出没收违法所得16.5元，没收不合格辣椒粉8.4斤，罚款人民币10000元的处罚。
5月 芙蓉分局根据市局工作交办函，查实长沙某农业科技有限公司分装经营的红椒面含罗丹明B。芙蓉分局依法对当事人作出没收违法所得459.8元，罚款人民币12000元的处罚。
5月 湖南省工商局抽样检验，雨花区高桥商贸城某门店经营的干野山椒粉二氧化硫残留量超标，干辣椒面含有罗丹明B。雨花分局依法对当事人作出责令立即停止违法行为，没收不合格干野山椒粉44斤、干辣椒面39.5斤，罚款人民币30000元，吊销营业执照的处罚。
5月 长沙县工商局根据省局通报：黄兴镇某公司生产的红干椒在娄底沃尔玛分店被检出含罗丹明B。长沙县工商局对当事人作出责令停止违法行为，没收违法所得23104.65元，并处罚款人民币60000元的处罚。
5月 长沙市工商局抽样检验，某大型购物广场销售的“邢氏”精品辣面含有罗丹明B、“菓王小子”墨鱼丝含甲醛、“塞翁福”虾皮二氧化硫残留量不符合食品安全标准要求。长沙市工商局依法对当事人作出责令立即改正违法行为，没收、销毁剩余食品，没收违法所得349.85元，罚款人民币50000元的处罚。
如何鉴别罗丹明B染色辣椒？
业内人士表示，正常的辣椒粉干燥、松散，呈红色或者红黄色，有辣椒强烈的刺鼻味。而染色辣椒非常鲜艳，但辛辣味并不强烈。还有一招，就是在辣椒面中加一点食用油搅拌，一段时间后油的颜色很红，就可能是染色辣椒。
劣质辣椒添加罗丹明B卖相好
劣质辣椒添加罗丹明B（Rhodamine B），华丽转身变成颜色鲜亮诱人的好辣椒，不仅卖相好，价格也就上去了。近日，浙江温州瓯海区人民法院公开开庭审理了这起销售有害食品案，四位被告人因销售染了色的毒辣椒被法院判处6至7个月的有期徒刑。
现年61岁的袁国，河南人，从2004年开始，在河南老家从事辣椒加工生意。
2012年年初，为节约成本，袁国在市场上购进了部分劣质辣椒，在对这些劣质辣椒进行染色处理后，与合格的辣椒混合经简单加工制成辣椒粉、辣椒干，并于今年年初销售给在温州菜篮子农副品批发交易市场经营副食品店的儿子袁鹏、女婿杨新、姚文。
袁鹏、杨新、姚文等人明知袁国在辣椒制品中添加染色剂的情况下，仍从袁国那贩进辣椒制品在各自的店内销售。
2012年4月13日、6月20日，瓯海工商分局对他们三家副食品店内的辣椒制品进行抽样检查，经鉴定，在抽取的样品中分别都检出了染色剂罗丹明B的成分。
据悉，罗丹明B又叫玫瑰红B，主要用于工业染色，玫瑰红B进入人体内经生物转化，可形成致癌物。国家卫生部明确将玫瑰红B列入非食用物质。
