应助达人

在反相上无保留的强极性物质，如含氨基类官能团的

这个对应的是我附件里关于保留弱的困惑。
另外一个问题是：HPLC结果显示有一个约6%的“杂质”，而核磁的结果未见明显杂质，两者有些矛盾，这个问题如何进一步确认？应以哪个结果为准？

应该以核磁结果为准。有些时候保留太弱，会出现双峰的情况的。你这个化合物，增加保留是首先要解决的问题。

我个人的理解首要问题是：确认HPLC中6%的“杂质”是如何来的？（也可能我的理解有问题）
尝试了多种条件（包括后续的改用离子对试剂），均有该“杂质”。
1、现配现进 ———— 应该不是溶液不稳定的问题；
2、连续多次重复进样，均可重现；更换不同的流动相体系，依旧有该“杂质” ———— 应该不是样品在流动相体系中降解产生。
关于增加保留的问题，我的理解是：使用离子对试剂应该可以实现。
PS:我之前使用的离子对试剂pH约9.2，主峰峰形展宽严重，更换成较低pH之后应该可以实现（个人理解，未经实验验证）。

这么说我觉得可能是这两个化合物存在构象异构的情况了。能问下你们做核磁的温度吗？或者你把柱温提到45-50度看看是否出单峰了（提高柱温有利于构象异构的自由翻转，就容易出单峰）。

你这个季胺，有点类似于肟，肟是具有构象异构的，所以我怀疑你这两个化合物也存在构象异构情况。

核磁的温度是：常温
关于构象异构和提高柱温有利于其翻转，这个我还确实没有这方面经验。
又给了我一个新的思路，谢谢！我尽快和研发同事沟通一下，也借此机会学习一下相应的知识。

核磁我接触的也少，烦请问一下：存在构象异构的话是不是在核磁中体现不出来？还是说核磁的高温可能引起其构象翻转，所以不体现？（这就是你之前询问核磁温度的出发点吗？）

我也不懂核磁，不过我们曾经有个含酰胺基团的化合物，核磁很干净，液相一直出双峰，提高柱温后出峰就正常了；不过也不是每个化合物都行，有些杂质就还是出双峰，毕竟色谱柱能耐受的温度也就那么高，不是所有的构象异构都能翻转。
高温使得化合物的能量升高，更有可能发生翻转，所以在核磁或HPLC体现是一个物质。
对了，肟准确说应该算是顺反异构。

应助达人

你用的应该是归一化法计算杂质含量吧，扣除溶剂峰了没有，另外归一化法本来就不是被认可的准确定量方法