TSKgel Chelate-5PW亲和色谱柱

TSKgel Chelate-5PW色谱柱是将亚氨基二乙酸（IDA）基团共价键合到G5000PW聚合物基质上。在亲和色谱之前将金属离子例如Zn²⁺、Ni²⁺或Cu²⁺，螯合到IDA基团上，金属离子结合在IDA基团上的三个配位点。因此，目标分子可以紧密地结合在金属离子的三个游离结合位点。由于结合的金属离子浓度很高（每mL凝胶为20μmol金属离子），TSKgel Chelate-5PW色谱柱对于目标分子有很高的结合力。

肽和蛋白质中的组氨酸残基在中性pH条件下通常会吸附到这些螯合离子上。使用含有咪唑或甘氨酸的缓冲液进行蛋白质解吸。成功利用这种保留机制的关键是选择合适的金属离子和洗脱缓冲液。Cu²⁺与蛋白质的相互作用更加强烈，Zn²⁺通常能提高分辨率。使用Zn²⁺时，色谱柱为饱和载量，而结合较强的Cu²⁺的载量大约为总量的一半。蛋白的洗脱通常通过梯度增加咪唑或甘氨酸浓度，或者梯度降低pH值来进行。甘氨酸（HEPES缓冲液中）是一种强洗脱液，也可以解吸金属离子，因此有必要在每次分析结束后对色谱柱进行再生。咪唑（磷酸盐缓冲液中）是一种弱洗脱液，有必要在色谱柱运行多次以后再生。