锤子
消耗积分 : 免积分
主要用途 组织切割酶/β分泌酶(MENAPSIN 2;β-SECRETASE)活性荧光共振能量转移法(FRET)定量检测试剂是一种旨在通过荧光探针EDANS供体和DABCYL受体双重标记的多肽底物,在/β分泌酶的水解作用下,释放出强烈荧光的EDANS,而发生荧光峰值的变化,即采用荧光共振能量转移法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解萃取液样品(动物、人体)、部分或完全纯化酶样品中切割酶/β分泌酶活性的定量检测,以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,安全可靠。 技术背景 切割酶/β分泌酶(β-SECRETASE;EC3.4.23.46),又称为淀粉样前体蛋白β位分解酶1(beta-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1;BACE1)或膜相关天冬氨酸蛋白酶2(membrane-associated aspartic protease 2;MENAPSIN 2),属于天冬氨酸蛋白酶(aspartyl protease)家属成员之一。为跨膜蛋白,有2个异构体,存在于酸性亚细胞囊泡(vesicles)中。β分泌酶切离淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein;APP)为100kD细胞外可溶性片段(extracellular soluble fragment)和12kD膜结合片段(membrane bound fragment),成为具有神经毒性的40至42氨基酸长的淀粉样β-多肽(amyloid-β peptide;Aβ)的前体C99。β分泌酶与周围神经细胞的髓鞘形成和阿茨罕默疾病(alzheimer disease;AD)的病理变化(淀粉样斑;amyloid plaque)相关,由此β分泌酶成为阿茨罕默疾病治疗的抗淀粉样多肽药物靶标。基于底物多肽Glu-Val-Asn-Leu- Asp-Ala-Glu-Phe-Lys(源于淀粉样前体蛋白的β分泌酶切离部位的瑞士突变序列668-675),通过荧光共振能量转移法(Fluorescence resonance energy transfer;FRET),即传递激发状态的能量由处于较短波长的供体(donor)到覆盖供体波长的受体(acceptor),使得距离依赖性反应的供体的散发光子淬灭(quench),使用2个荧光探针EDANS供体和DABCYL受体作为FRET对,来标记的β分泌酶选择性多肽底物的两端,在β分泌酶的水解作用下,在亮氨酰(leusinyl)和天冬氨酰(aspartyl)残基处切离,释放出强烈荧光的EDANS,在荧光分光光度仪下(激发波长340nm,散发波长490nm),来定量测定β分泌酶的活性。其反应系统为: β-SECRETASE H-RE(EDANS)EVNLDAEFK(DABCYL)R-OH → H-RE(EDANS)EVNL + DAEFK(DABCYL)R-OH
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