蛋白质分子量的测定：SEC-MALS 与传统校正法

溶液中蛋白质的物理性质和行为取决于与蛋白质的纯化和构成及其 自身固有属性相关的多种因素。 尺寸排阻色谱 (SEC) 是一种强大的工 具，常用于分析蛋白质的回收率、分子量和聚集性。 SEC 的工作原理涉及在样品流经多孔的惰性色谱柱基质时对样品进 行分离。 较小的分子进入填料孔内，而较大的分子则被排除在外，因 此可更快速地通过色谱柱。 结果是获得基于流体力学体积的分离，但 是人们通常要求得出分子量。 以前，通过比较未知蛋白质与（已知分 子量的）标准球状蛋白质的洗脱时间估算分子量，我们把这一过程称为 “传统校正法”。 通常使用诸如紫外 (UV) 等单一的浓度检测器完成上 述操作。 然而，现在我们联合使用光散射检测器和浓度检测器（紫外 或折光率，RI），可不依赖保留时间测定蛋白质分子量。 这一进步非 常有用，因为许多蛋白质不具有球状结构，使得它们测得的分子量不准 确。 由于增加了更多检测器（如另一台浓度检测器）、特性粘度 (IV) 和动态光散射 (DLS) 检测，可极大地增加单次 SEC 测定所获得的信息 量。 Malvern SEC-MALS 20系统是一款 20 角度光散射设备， 能够不依赖于洗脱体积测定蛋白质分子量。 在此应用说明中，一些蛋 白质使用 SEC 进行分离。 使用多角光散射 (MALS) 或传统校正法测定 它们的分子量， 并讨论了这些结果的差异。