【流式】流式细胞检测法分析在细菌表达外源蛋白过程中的蛋白聚集作用

随着重组DNA 技术的发展，经常将细菌用于表达外 源蛋白。细菌表达的可溶性蛋白可表达在胞质中， 或将其分泌至胞质周围或细胞外。通常，表达在胞质 中的蛋白表达水平要高于其分泌的表达水平。许多 疏水性蛋白和高表达的蛋白在胞质可形成难以溶解 的、并聚集而成包含体。胞质周围或细胞外的目标 蛋白通常无法实现全部分泌，并形成不溶性的聚集体 。表达菌的不同生长和诱导条件有时可以使不溶性 的蛋白得到可溶性表达。检测菌体内蛋白聚集体最常使用的方法包括分离细 胞、超声破碎细胞、通过离心从不溶性蛋白中分离 可溶性成分，最后，使用聚丙烯凝胶电泳，鉴定 目标蛋白所处的位置。目前，一种新的染料—— Proteostat®（ENZO Life Sciences ENZ-51035） 能特异性地对淀粉样蛋白类型的聚集体进行染色，所 以可以通过Proteostat 对菌体内过表达蛋白形成的 聚集体进行染色鉴定。在本应用说明中，描述一种 使用CytoFLEX 流式细胞仪简单而快速鉴定细菌内 表达的蛋白聚集体的方法。（作者：Jack Coleman 1 Melis McHenry 2 所属单位： 1 ENZO Life Sciences, Farmingdale NY 2 Beckman Coulter Inc, Miami FL）