Q Exactive HF DIA实现高通量酵母蛋白质组定量

2018/01/29   下载量： 11 次

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应用领域 生物产业
检测样本 生物发酵
检测项目
参考标准 传统的基于母离子强度的 DDA 定量

展示了 DIA 定量重现性好，missing values 少和 CV 小等优点。仅通过 90 min 的梯度 DIA 就能定量接近 30000 个肽段，3000 个蛋白, 实现高通量定量分析。

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    数据非依赖性的扫描模式（data-independent acquisition, DIA）是近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式(1)。DIA 扫描模式中，利用超高分辨质谱对特定质量范围内的所有母离子进行碎裂，采集所有母离子的碎片离子，并依次快速地扫描相邻的母离子窗口内的所有碎片离子。DIA 的数据中包含了所有碎片离子的保留时间和强度信息。因此，可以用非常小的质量偏差窗口（如 10 ppm）目标性地抽提同一肽段的多个子离子，计算子离子的强度，就能对该肽段进行鉴定和定量。相比传统的基于母离子强度的 DDA 定量，DIA 定量具有选择性好和定量准确等优点，因此 DIA 成为定量蛋白组学新的热门发展方向。
    Q Exactive HF 是赛默飞世尔科技在 2014 年的 ASMS 上推出的全新静电场轨道阱超高分辨质谱仪(3, 4)。Q Exactive HF 采用了分段式四级杆技术（Advanced Quadrupole Technology，AQT）使离子传输效率至少提高了 2 倍；超高场 Orbitrap 技术，提高了 Orbitrap 扫描速度，在 15000 分辨率时，二级谱图的扫描速度是 20 Hz。这两项技术提高了 Q Exactive HF 进行 DDA 和 DIA 数据的采集能力。本文用 Q Exactive HF 质谱，90 min 色谱梯度对酵母蛋白质组进行 DIA 定量分析，考察 Q Exacive HF DIA 定量的能力。

    本文基于 Q Exactive HF 质谱，对两种酵母细胞系进行了短梯度的 DIA 定量分析，展示了 DIA 定量重现性好，missing values 少和 CV 小等优点。仅通过 90 min 的梯度 DIA 就能定量接近 30000 个肽段，3000 个蛋白, 实现高通量定量分析。

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文献贡献者

赛默飞色谱与质谱
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