方案摘要
方案下载| 应用领域 | 制药/生物制药 |
| 检测样本 | 中药材和饮片 |
| 检测项目 | 含量测定>色谱法, 质谱法 |
| 参考标准 | 国标 |
本实验采用Orbitrap ID-X Tribrid MS高分辨液质联用技术，结合Compound Discoverer软件中的代谢物分析工作流程，对中药柴胡体外肠内菌代谢物进行了快速准确的分析。Compound Discoverer内置I相+II相代谢途径，针对已知和未知代谢物开采用质量亏损过滤（MDF），碎片离子搜索策略（FISh），特征同位素，共有碎片检索等方式，寻找代谢物；同时软件提供多种统计学工具，通过不同给药时间点或不同处理方式统计学差异，确证代谢物。选择柴胡中鉴定到的代表性物质柴胡皂苷A和绿原酸为母药，在孵育基质样品中柴胡皂苷A正离子模式共鉴定出14种可能的代谢物，负离子模式鉴定出11种可能的代谢物；绿原酸共鉴定出5种可能的代谢物。
传统中药以口服用药为主，其化学成分受胃肠道酸碱性、肠道微生 物及代谢酶等影响常发生转化，使其生物利用度降低，体内除中药 原形成分外，还可能有大量代谢产物的存在，这些体内吸收化学 成分是阐明中药发挥药效机制的直接物质基础。要想揭示中药体内 药效物质，代谢产物研究是不可缺少的重要组成部分，尤其是苷类 及其他结构易转化的化学成分（如萜类等），其生物利用度较低， 在体内主要以代谢产物的形式存在，在此种情况下，代谢产物可能 是药效的唯一或主要来源[1]。然而，由于中药成分的代谢规律不明 确、代谢产物含量低难以鉴定等原因，大大制约了中药体内药效物 质基础的研究。
为了更加深入的研究中药体内药效物质基础，需要利用高分辨质谱 对中药体内代谢物进行更深度的鉴定分析。然而由于中药体内的代 谢物通常含量很低，且同时受到基质背景的干扰，传统LC Q-TOF MS高分辨质谱的DDA数据采集模式难以获得低含量代谢物的二级 质谱图用于结构鉴定。新一代Orbitrap ID-X Tribrid三合一质谱仪由 于具有Acquire X智能化数据采集模式，自动迭代生成排除列表及 包含列表，可以获得极低含量组分的多级质谱用于代谢物的深度分 析。
柴胡Bupleuri Radix为伞形科植物柴胡（又称北柴胡）Bulpeurum chinese DC. 和狭叶柴胡（又称南柴胡）Bulpeurum scorzonerifolium Willd的干燥根，其性味苦凉、微寒，具有解表和里、疏肝解 郁、升举阳气之功效[2]。柴胡化学成分复杂，其中皂苷类、挥发油 类、黄酮类为柴胡的主要活性成分，具有免疫调节、抗抑郁、保 肝、抗肿瘤、解热抗炎等药理作用[3-5]。近年来，液相色谱-质谱联 用技术（LC-MS）的成熟与发展已被应用于柴胡皂苷类组分的代谢研究[6,7]。然而，单个活性组分的代谢研究以及部分代谢物的鉴定结 果仍然无法全面综合的评价柴胡的质量和体内药效物质基础。
本实验采用离体实验的代谢研究方法，通过具有AcquireX采集功能 的Orbitrap ID-X Tribrid MS技术对柴胡代谢产物进行整体分析。首先 用富含肠内菌的粪便悬浮液与柴胡提取物在厌氧条件下温孵，利用 Compound Discoverer 3.0代谢物分析软件对采集的高分辨质谱数 据进行解析，最终构建柴胡的肠内菌代谢指纹图，以期为中药的临 床合理应用奠定理论基础。
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