维生素(Vitamin)又被称为维他命,是维持正常生理功能所必需的一类微量物质。
维生素从化学性质上可大致分为水溶性和脂溶性维生素。脂溶性维生素主要以维生素 A(视黄醇),维生素 D(25-羟基 D2,25-羟基 D3),维生素 E(α-生育酚),维生素 K(叶绿醌 K1)为主。人体对维生素的需求很小,但是不可缺乏,一旦缺乏就会引发相应的维生素缺乏症。比如缺乏维生素 A 容易引起夜盲症、干眼症、皮肤病、免疫功能低下和感染增多[1],缺乏维生素 D 除了可引起与骨骼肌肉相关的疾病还与多种疾病的存在相关[2];维生素 E 是重要的生物抗氧化剂,可以增强身体免疫能力,保护肝脏,预防皮肤出现角质层增厚等功效,在新生儿中容易出现维生素E缺乏的现象,容易引起新生儿贫血、全身水肿和神经系统症状[3]。维生素 K1 是肝脏合成凝血酶原不可缺少的物质,其作用是促使凝血酶原前体转变为凝血酶原。缺乏时会引起低凝血酶原血症,出现凝血障碍[4]。
[1]N.JI.克里察金,周景春.维生素A缺乏病.《人民军医》.1953
[2]毛萌,刘震.维生素D3生理功能及临床应用[J].华西医学,1991,8(3);299-301.
[3]卢宪梅.新生儿维生素E缺乏病.《山东医药》,1994
[4]王镜岩 朱圣康 徐长法.生物化学(第三版 上册),北京:高等教育出版社,2002:6
安捷伦 LC-MS/MS 解决方案
安捷伦建立了人血清/血浆中 5 种脂溶性维生素的定量检测方法,可以同时测定血清中的视黄醇(VA)、25-羟基维生素 D2(25-OHD2)、25-羟基维生素 D3( 25-OHD3)、α-生育酚(VE)、叶绿醌(VK1)。
检测方法
液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)
仪器
Infinity LC Clinical Edition/K6460(包含了液相色谱仪、三重四极杆质谱仪、MussHunter Workstation 采集软件),注册证号:国械注进20202220004
质谱条件
方法学考察及验证
人血清样品标准 LC-MS/MS 色谱图
图 1 人血清样品 MRM 色谱图
峰归属(基于洗脱时间)25-OHD3、25-OHD2、VA、VE、VK1
灵敏度
标准曲线 S1 浓度下,样品灵敏度情况如下图所示:
图 2 人血清基质样品种 S1 浓度级别 LC-MS/MS 色谱图
5 种脂溶性维生素的定量下限分别为:VA 17.8ng/mL,25-OHD2 0.35ng/mL,25-OHD3 1.2ng/mL,VE 225.7ng/mL,VK1 0.16ng/mL。
线性范围及相关系数
图 3 5 种脂溶性维生素标准曲线
线性范围:VA 17.8 – 2287.8 ng/mL, 线性相关系数 r 大于 0.99;25-OHD2 0.35-45.0 ng/mL,线性相关系数 r 大于0.99;25-OHD3 1.2-77.1 ng/mL,线性相关系数 r 大于0.99;VE 225.7- 28891.5 ng/mL,线性相关系数 r 大于0.99;VK1 0.16-20.49 ng/mL,线性相关系数 r 大于 0.99。
准确度:各浓度点均在 80% - 120% 以内。
回收率
本方法人血清样品高低两个浓度级别的添加回收率满足 85.0% - 115.0% 要求,实测结果:回收率情况如下表。
表 3 加标样品回收率情况
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