该实验可以通过紫外可见分光光度计实现。通常的测试方法为测定核酸类药物在 260nm 处的吸光度值随温度变化的曲线。随着温度的升高,双链结构逐渐打开,260nm 处的吸光度值逐渐升高,直至完全打开成单链后吸光度值保持稳定,当双链结构失去一半时所对应的温度定义为解链温度(Tm 值)。
在此实验中,最重要的是要控制温度的变化,传统的紫外分光光度计需要使用复杂的附件来控制温度,例如,水控温系统需要插额外的管线并进行换水和清洁的工作。同时,测试耗时长,至少需要 1 个小时以上才能完成。
借助 Cary3500 UV-Vis 紫外可见分光光度计可在 10 分钟内完成解链温度的分析。
Cary3500 UV-Vis 紫外可见分光光度计采用帕尔贴风冷控温系统,升温降温全程电子控温,无需额外管线。搭配温度探头触达溶液,精准实现溶液内的温度控制,同时,搅拌子可使每个样品的温度保持均匀,这样就可以设置更快的升温速率,缩短分析时间,且不会降低数据质量。
Cary3500 UV-Vis 最快可设置 40℃/min 的升温速率,经过验证,不同的升温速率下得到的 Tm 值的波动小于 0.4℃。
图 1. 鲱鱼精子 DNA 吸光度与温度 (A) 和相应的一阶导数 (B) 作为升温速率的函数
另外,Cary3500UV-Vis 多池控温的选项,可以以快速升温实现 4 个样品的同时测试和慢速升温实现 7 个样品的同时测试。
下面,我们通过视频来查看下 Cary3500 是如何实现热解链温度的测试的。
当然,Cary3500UV-Vis 的操作软件也可以与 Agilent OpenLab 软件集成。OpenLab 提供技术控制来安全地获取、处理报告和存储数据。对于必须遵循 FDA 21 CFR Part 11,欧盟附录 11,GAMP5 以及 ISO/IEC 17025 和 EPA 40 CFR Part 160 合规指南的实验室来说,这些控制是必不可少的。
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