在 AdvanceBio SEC 聚集体分析之后 进行 Protein A 亲和 IgG 捕获——采用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案

2018/08/31   下载量： 9 次

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应用领域 生物产业
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本应用简报介绍了使用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案对生物治疗样品中聚集体的定量分析。Protein A 亲和捕获在第一维中进行，而体积排阻色谱在第二维中进行。多中心切割用于将样品从第一维转移到第二维。这项技术能够在一次分析中完成整个表征，无需进行馏分收集和多次进样。

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本应用简报介绍了使用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案对生物治疗样品中聚集体的定量分析。Protein A 亲和捕获在第一维中进行，而体积排阻色谱在第二维中进行。多中心切割用于将样品从第一维转移到第二维。这项技术能够在一次分析中完成整个表征，无需进行馏分收集和多次进样。

前言

蛋白质治疗远远比小分子药物的治疗复杂，因此，阐明这种复杂性成为了一个分析难题。在对这些分子进行开发和使用期间，需要对它们进行深入表征。

Protein A 是在金黄色葡萄球菌细胞壁中发现的免疫球蛋白-Fc (IgG) 受体。这种蛋白质对多克隆和单克隆 IgG（如人 IgG 1、IgG 2 和 IgG 4 以及来自兔和小鼠等其他物种的 IgG）具有较强的亲和性。固定化的 Protein A 常用于 IgG 的制备和生产级纯化。Agilent Bio-Monolith Protein A HPLC 分析型色谱柱可用于对复杂混合物或纯样品中的 IgG进行快速定量分析和小规模纯化。

体积排阻色谱 (SEC) 则是生物治疗样品中聚集体定量分析的首选方法。使用 SEC 聚集体分析之后进行 Protein A IgG 捕获，可生成更准确的表征结果，因为所分析的样品更加纯净。采用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案可使这种分析在一次进样中完成。IgG 的 Protein A 捕获在第一维中进行。然后，在多中心切割定量环中采集洗脱的 IgG，并在第二维中将其洗脱到 Agilent AdvanceBio SEC 体积排阻色谱上，以进行准确的聚集体分析。

结论

Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案为在一个方法中测定 mAb 滴度和聚集体提供了一种通用而高效的方法，无需进行馏分收集和多重进样。Agilent Bio-Monolith Protein A 亲和色谱柱作为二维液相色谱工作流程的第一维，有助于在滴度测定中实现 mAb 的分析级纯化，并可在聚集体分析前作为初始纯化步骤。Agilent AdvanceBio SEC 300 Å 色谱柱对聚集体与单体的分离表现出优异的分离度，可在二维液相色谱工作流程中作为第二维实现准确的评估。

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安捷伦科技(中国)有限公司
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