方案摘要
方案下载应用领域 | 生物产业 |
检测样本 | 生物能源 |
检测项目 | |
参考标准 | / |
前言 全球结核病 (TB) 的发病率非常高,据估计仅 2014 一年中就有 960 万新增 TB病例,并有 150 万名患者死于 TB [1]。采用代谢组学技术可以确认 TB 生物标记物,使我们对该疾病的认识取得很大进展。本研究中利用结核分枝杆菌(Mtb) 感染的小鼠模型来确定未感染和已感染 TB 的肺组织的代谢情况。 为了确认感染后产生的新病理生理途径和 TB 生物标记物,使用未感染和已感染(感染第 9 周)的肺组织进行非靶向代谢组学研究。在初步化合物标注之后,使用低能量 EI 数据确认分子离子,并分别鉴定初步分析出的化合物 与未知物的分子式。
实验
将 50000 CFU 的结核分枝杆菌 (Mtb) H37Rv 采用气管内注入法使小鼠接受感染。将肺组织干燥提取物进行甲氧化衍生,然后三甲基硅烷化。使用 Agilent 7890B GC 系统与配有 EI 源的新型高分辨率 Agilent 7250 GC/Q-TOF 联用进行 GC/MS 分析,该 EI 源可以进行低能量电离(图 1)。除了配有新型低能量 EI 源,7250 系统还具有高分离能力(在 m/z 272 处为 25000)、更高的质量精度以及更宽的动态范围。表 1 显示了仪器参数。
当使用 Fiehn.L RI 数据库进行初步化合物鉴定时,保留时间锁定 (RTL) Fiehn 方法便于进行鉴定。此外,还使用美国国家标准技术研究院数据库 (NIST.L) 以及精确数量数代谢组学 PCDL 以鉴定出更多化合物。使用 Agilent MassHunter 未知物分析软件 B.08.00 中的 SureMass 信号处理进行特征检测。使用 Agilent Mass Profiler Professional(MPP) 13.0 进行统计分析。Pathway Architect 是 MPP 的扩展工具,用于确认与 TB 感染有关的生化通路。
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