氨基酸是构建生物机体的众多生物活性大分子之一,是构建细胞、修复组织的基础材料。它被人体用于制造抗体蛋白、血红蛋白、酶和激素以维持和调节新陈代谢,是一切生命之源。
由于氨基酸的重要性,合适可靠的检测方案将成为评估食品、饲料、药物及生理样品中氨基酸指标的重要选择。
HPLC—柱后衍生法,50多年来作为氨基酸领域的重要检测手段,因为其高效的测试准确性和重现性,深受广大用户的信赖。
氨基酸检测在药物、食品、饲料中的主要应用有
● 通过分析氨基酸组鉴定多肤和蛋白质;
● 原料药和中间体中的杂质和有关物质的测定;
● 药物中单个或总氨基酸的定量, 包括复杂基质中标记物的测定;
● 重组蛋白生产过程的控制;
● 确定氨基酸组成也是保证食品和饲料营养价值的必要条件;
● 用于产品质量及过程监测。
衍生方法介绍
Pickering Laboratories根据上述应用的检测对象的不同,将衍生方法分为OPA衍生法和茚三酮衍生法,两种方法都可以与任何氨基酸阳离子交换柱和洗脱液组合使用。其中我们称为Trione ®的*茚三酮试剂,也广泛应用于氨基酸分析仪中。
OPA法与茚三酮法区别见下表:
氨基酸衍生法 | ||
_ | Trione®试剂(*)分析法 | OPA试剂分析法 |
衍生试剂 | TlOO-预混试剂 ;自生产日期起计算, 4个月保质期(950 ml/瓶)
TlOOC -预混试剂;自生产日期起计算, 4个月保质期(950 mL/瓶)
T200 - 2部分试剂,混合后使用,从生产之日起12个月保质期;4组/箱 (900mL/瓶) | OD104-氨基酸分析用OPA稀释液;
O120-OPA试剂(5g/瓶)
3700-2000 -疏基化合物。(10g/瓶)
这三种产品都是用于氨基酸OPA分析法 |
适用样品 | 一级和二级氨基酸 | 一级氨基酸
在与OPA反应之前需要检测二级氨基酸氧化步骤。使用氧化步骤时,一级氨基酸的检测灵敏度会有所降低。 |
检测器 | UV/VIS | FLD |
仪器灵敏度 | 10 pmole (在色谱柱上) | 2 pmole (在色谱柱上) |
色谱柱&洗脱液 | 适用于任何阳离子交换柱氨基酸分析法 | 与任何用于氨基酸分析的阳离子交换柱配合使用 |
配置 | 单泵Ony×PCXI vector PCX+ 0.5 m L反应器 | 单泵Ony×PCX/ vector PCX+ 0.15 ml反应器。
*需要带有0.5 mL和0.1 mL反应器的双泵OnyxPCX来检测二级氨基酸。 在此模式下, 初级氨基酸的灵敏度会降低。 |
色谱柱的选择
图1:钠柱氨基酸分析选择
图2:锂柱氨基酸分析选择
图3:氨基酸标品
图4:豆粕样品
图5:水解单克隆样品
Pickering产品
完整解决方案
欧洲药典8.0对于氨基酸的柱后衍生茚三酮法做了详细的要求,药典对于包括化学、 动物、 人或草药来源的活性物质、赋形剂和制剂,顺势疗法制剂,抗生素,制剂和容器等都有所要求。
Pickering Laboratories 将欧洲药典作为测试依据,为客户提供完整的氨基酸分析解决方案。
Pickering 柱后衍生仪
解决方案包括Onyx PCX/Vector PCX 柱后衍生仪器、分析柱、保护柱、缓冲液和Trione ®茚三酮试剂。并且对方法进行了优化, 在符合药典各项体系适宜性要求的同时,提高了分析的灵敏度及分析效率。
Pickering全套试剂包
图6:依据欧洲药典8.0法测试氨基酸
关于Pickering Laboratories
美国Pickering Laboratories公司是全球仅有的专业提供人工测试体液和柱后衍生化学试剂、色谱柱、分析方法等柱后衍生分析整体解决方案的机构,其不断创新及良好的信誉被众多的美国政府机构如EPA、ATF、FDA、AOAC和世界知名的厂商所认可。
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